5. Dự kiến kết quả đạt được
3.1.3. Kết quả xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ)
(LOQ)
3.1.3.1. Khảo sát mẫu trắng
Tiến hành thí nghiệm lặp lại 14 lần đối với mẫu trắng là tinh bột biến tính được xác định là không chứa glucose và không bị thủy phân.
Cân chính xác khoảng 0,2 gam mẫu trắng và chuẩn bị dung dịch trước và sau khi thủy phân với các điều kiện như đã nêu ở mục 2.2.3.2 và 2.2.3.3, sau đó đo độ hấp thụ của các dung dịch ở bước sóng 550 nm.
Các giá trị đo được đều nhận giá trị âm chứng tỏ trong mẫu không chứa glucomannan.
3.1.3.2. Xác nhận LOD, LOQ
Dùng phương pháp thêm chuẩn vào mẫu trắng: lấy 7,5 ml dung dịch glucomannnan chuẩn nồng độ 2 mg/ml vào bình tam giác dung tích 100 ml đã chứa sẵn 0,2 gam mẫu trắng (tinh bột biến tính) và tiến hành chuẩn bị dung dịch thử như ở mục 2.2.3.2, thủy phân và đo độ hấp thụ như ở mục 2.2.3.3.
Nồng độ của dung dịch glucomannan trước thủy phân là 0,15 mg/ml. Nồng độ glucomannan thực tế trong mẫu thử được tính theo công thức:
C glucomannan = F x C glucose tính toán (3.1) Trong đó:
F: hệ số tương quan; F = 28,38.
C glucose tính toán : nồng độ glucose tính theo đường chuẩn.
C glucomannan : nồng độ glucomannan thực tế trong mẫu thử.
Lặp lại thí nghiệm như trên 6 lần. Kết quả các giá trị nồng độ glucomannan thực tế trong mẫu thử đo được thể hiện ở bảng 3.2.
Bảng 3.2: Kết quả xác định giới hạn phát hiện LOD bằng phƣơng pháp thêm chuẩn
Nồng độ glucomannan thực tế trong mẫu thử đo đƣợc (µg/ml) Lần 1 147,00 Lần 2 147,00 Lần 3 147,24 Lần 4 147,36 Lần 5 147,76 Lần 6 147,46 Giá trị trung bình 147,30 SD 0,266
Giá trị giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của glucomannan được xác định bởi các công thức tính sau:
LOD = 3,3 x SD/a (3.2) LOQ = 10 x SD/a (3.3) Trong đó:
SD: độ lệch chuẩn của 6 lần đo lặp lại; SD = 0,266. a: độ dốc của đường cong chuẩn; a ~ 0,0415.
Như vậy đã xác định được:
Giá trị giới hạn phát hiện LOD = 21,15 µg/ml. Giá trị giới hạn định lượng LOQ = 64,10 µg/ml.