3.4. Tạo dòng tế bào lai đơn sản xuất kháng thể đơn dòng kháng lại kháng nguyên A nguyên A
Trong một giếng dung hợp có thể có nhiều hơn một dòng tế bào lai do vậy cần tiến hành tách dòng hỗn hợp tế bào lai trong giếng ban đầu để thu nhận các dòng tế bào lai đơn. Mỗi dòng tế bào đơn chỉ sản xuất một loại kháng thể do đó kháng thể thu nhận từ dòng tế bào lai này đƣợc gọi là kháng thể đơn dòng. Từ 6 giếng chứa hỗn hợp tế bào lai tiết kháng thể kháng kháng nguyên A, tiến hành tách dòng bằng phƣơng pháp pha loãng tới hạn theo 2 chiều của đĩa nuôi cấy 96 giếng. Từ 576 giếng tách dòng thu nhận đƣợc 27 giếng có chứa tế bào đơn nhƣ vậy hiệu quả tách dòng đạt 4,7%. Trong 27 giếng có chứa dòng tế bào lai đơn phát triển, dịch nuôi cấy của 27 giếng này đƣợc kiểm tra khả năng sản xuất kháng thể kháng kháng nguyên A thì có 12 dòng tiết kháng thể kháng kháng nguyên A (A4D11A9, A4D11F2, A6G11B8, A6G11B10, A6G11C9, B4D10C6, A6G11D5, A6G11D7, A6G11E7, A7B4C11, A7D4G10, A7D4H8). Các dòng tế bào lai đơn này sẽ đƣợc nuôi cấy trên đĩa 24 giếng sau đó chuyển sang chai T25 cm2 để thu tế bào cất giữ trong nitơ lỏng còn dịch nuôi cấy đƣợc kiểm tra để xác định trong 12 dòng tế bào này dòng nào sản xuất kháng thể tốt nhất. Sau khi xác định hiệu giá của kháng thể do 12 dòng tế bào lai đơn sản xuất chúng tôi
A B O A B O A B O Hồng cầu mẫu 1%
xác định đƣợc dòng tế bào lai A6G11C9 có khả năng sản xuất kháng thể đơn dòng tốt nhất với hiệu giá kháng thể đạt 29.
Hình 3.8. Sàng lọc dòng tế bào lai đơn sản xuất kháng thể kháng kháng nguyên A
Hình 3.9. Chọn dòng tế bào lai sản xuất kháng thể kháng kháng nguyên A tốt nhất