Để tạo đƣợc tế bào lai chuột sản xuất kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyên A, trƣớc hết cần gây miễn dịch cho chuột để thu nhận quần thể tế bào lympho B sản xuất kháng thể kháng kháng nguyên A. Hồng cầu mẫu A+ có kháng nguyên A trên màng hồng cầu do vậy nó đƣợc sử dụng để gây miễn dịch cho chuột Balb/c theo đƣờng tiêm vào gan bàn chân chuột để thu nhận quần thể tế bào lympho B trong hạch lympho ngoại vi (hạch vùng kheo) và lách. Trƣớc khi dung hợp, chuột đƣợc gây mê để thu máu ở tim sau đó tách lấy huyết thanh. Huyết thanh từ chuột đã gây miễn dịch đƣợc làm phản ứng ngƣng kết với hồng cầu mẫu A+
, B+ và O+ để đánh giá hiệu quả gây miễn dịch của hồng cầu mẫu A+.
Hình 3.1. Phản ứng ngƣng kết giữa huyết thanh của chuột đƣợc gây miễn dịch với hồng cầu mẫu A+, B+, O+
Quan sát kết quả ngƣng kết (Hình 3.1) nhận thấy, huyết thanh của chuột đã gây miễn dịch ngƣng kết với hồng cầu mẫu A+ chứng tỏ hồng cầu mẫu A+ đã kích hoạt thành công hệ thống miễn dịch của chuột để hình thành đáp ứng miễn dịch dịch thể. Huyết thanh của chuột đã gây miễn dịch không chỉ ngƣng kết với hồng cầu mẫu A+ mà còn ngƣng kết với cả hồng cầu mẫu B+ và O+. Điều này chứng tỏ rằng không chỉ kháng nguyên A trên màng hồng cầu A+ kích thích chuột hình thành đáp ứng miễn dịch mà các kháng nguyên khác trên màng hồng cầu A+ cũng kích thích chuột hình
thành đáp ứng miễn dịch dịch thể và các kháng nguyên này cũng có mặt trên hồng cầu mẫu B+ và O+. Nhƣ vậy, quần thể tế bào lympho B thu nhận từ chuột đã gây miễn dịch với hồng cầu mẫu A+ là tập hợp các tế bào lympho B khác nhau sản các xuất kháng thể đặc hiệu với các kháng nguyên khác nhau trên màng hồng cầu trong đó các tế bào lympho B sản xuất kháng thể kháng kháng nguyên A.
Hình 3.2. Lách và hạch vùng kheo thu đƣợc từ chuột đƣợc gây miễn dịch với hồng cầu mẫu A+
Sau khi đánh giá khả năng gây miễn dịch của hồng cầu mẫu A+
bằng phản ứng ngƣng kết hồng cầu, tiến hành giết chuột thu lách và hạch lympho để tách lấy tế bào lympho B bằng phƣơng pháp cơ học. Lách và hạch thu nhận từ chuột gây miễn dịch có kích thƣớc khá lớn (Hình 3.2) nhƣ vậy có nhiều tế bào lympho B tập trung tại đây chứng tỏ hiệu quả gây miễn dịch cho chuột là tốt.