30 hạt của mỗi dòng chuyển gen T0 được cho nảy mầm trong môi trường MS/2 chứa 50 mg/L Hygromycin. Kết quả thu được 4 dòng tăng cường biểu hiện gen ANK1, 3 dòng tăng cường biểu hiện gen ANK2, 3 dòng mang vector rỗng cho tỷ lệ nảy mầm 3 :1, có khả năng chỉ mang một bản sao T-DNA trong hệ gen.Các dòng này được chuyển ra trồng trong nhà lưới để kiểm tra lại số lượng bản sao T- DNA và chọn lọc cây đồng hợp bằng kỹ thuật qPCR theo phương pháp mô tả bởi Zhang và cộng sự. Số lượng bản sao T-DNA được đánh giá dựa trên tỷ lệ bản sao của gen HPT với gen tham chiếu Sucrose Phosphate Synthase (SPS) (U33175.1) chỉ có 1 bản sao trong hệ gen lúa. Kết quả phân tích 13 dòng T1.OE-ANK1 thu được 3 dòng mang 1 bản sao T-DNA và đồng hợp tử (24.1.3 ; 24.1.4 và 2.7.6), 5 dòng mang 1 bản sao T-DNA nhưng ở thể dị hợp (9.5.1 ; 9.5.2 ; 9.5.5 ; 9.5.12 và 2.7.5), 5 dòng có tỉ lệ 2Ct reference−Cttransgene< 0.5, chưa xác định được số lượng bản sao T-DNA và 1 dòng T1.OE-Ø đơn bản đồng hợp tử (Bảng 6).
Đối với các dòng T0.OE-ANK2, sức sống của các cây chuyển gen rất yếu. Phần lớn các dòng T0.OE-ANK2 sau khi được chuyển từ môi trường invitro ra môi trường ngoài nhà kính có dấu hiệu héo dần và chết, chỉ thu được hạt của 4 dòng (5.3.2; 5.3.3; 5.3.4; 5.3.5). Kết quả đánh giá số lượng bản sao T-DNA các cây T1 chỉ xác định được dòng 5.3.5 mang 1 bản sao T-DNA, đồng hợp tử. Hai dòng 5.3.2, 5.3.4 mang hai bản sao T-DNA trong hệ gen, chưa xác định được kiểu gen, dòng 5.3.3 chưa xác định số bản sao T-DNA (Bảng 7). Số bản sao T-DNA và kiểu gen của ba dòng này sẽ được đánh giá lại ở thế hệ sau.
Bảng 6. Kết quả đánh giá số bản sao T-DNA và kiểu gen của các dòng lúa chuyển gen T1.OE-ANK1
Dòng chuyển gen
T0 Dòng chuyển gen T1 Kết quả
qPCR
Số bản sao T-
DNA Kiểu gen
T0.OE-ANK1_17.1
T1.OE-ANK1_17.1.1 0,223 Chưa xác định Chưa xác định
T1.OE-ANK1_17.1.2 0,178 Chưa xác định Chưa xác định
T1.OE-ANK1_17.1.3 0,231 Chưa xác định Chưa xác định
T1.OE-ANK1_17.1.5 0,179 Chưa xác định Chưa xác định
T0.OE-ANK1_24.1 T1.OE-ANK1_24.1.3 1,170 1 Đồng hợp T1.OE-ANK1_24.1.4 1,069 1 Đồng hợp T0.OE-ANK1_9.5 T1.OE-ANK1_9.5.1 0,575 1 Dị hợp T1.OE-ANK1_9.5.2 0,698 1 Dị hợp T1.OE-ANK1_9.5.5 0,487 1 Dị hợp T1.OE-ANK1_9.5.12 0,416 1 Dị hợp
T1.OE-ANK1_9.5.13 0,131 Chưa xác định Chưa xác định
T0.OE-ANK1_2.7
T1.OE-ANK1_2.7.5 0,519 1 Dị hợp
T1.OE-ANK1_2.7.6 1,289 1 Đồng hợp
Bảng 7. Kết quả đánh giá số bản sao T-DNA và kiểu gen của các dòng lúa