Dòng chuyển gen
T0 Dòng chuyển gen T1 Kết quả
qPCR
Số bản sao T-
DNA Kiểu gen
T0.OE-ANK2_5.3
T1.OE-ANK2_5.3.2 2,352 2 Chưa xác định
T1.OE-ANK2_5.3.3 0,177 Chưa xác định Chưa xác định
T1.OE-ANK2_5.3.4 2,032 2 Chưa xác định
T1.OE-ANK2_5.3.5 1,130 1 Đồng hợp
3.4.3. Đánh giá mức độ biểu hiện của gen ANK1, ANK2 trong các dòng chuyển gen chuyển gen
Mức độ biểu hiện của gen ANK1 và ANK2 được đánh giá trong các dòng chuyển gen chỉ mang 1 bản sao T-DNA ở thể đồng hợp và thể dị hợp bằng qRT- PCR. Mồi CDS-ANK1-F, CDS-ANK1-R và CDS-ANK2-F, CDS-ANK2-R (Bảng 1) được thiết kế trong vùng trình tự mã hóa của 2 gen, sử dụng gen tham chiếu
ACTIN để tính mức độ biểu hiện tương đối của gen ANK.
Phân tích kết quả qRT-PCR với cặp mồi đặc hiệu của gen ANK1 cho thấy mức độ biểu hiện của gen đều được tăng lên trong các dòng chuyển gen T1. Mức độ biểu hiện của gen ANK1 được chia thành 3 nhóm với mức độ biểu hiện khác nhau. Nhóm thứ nhất gồm hai dòng T1.OE-ANK1_2.7.5 và T1.OE-ANK1_2.7.6 có nguồn gốc từ mô sẹo chuyển gen số 2, với mức độ biểu hiện lần lượt tăng 7 và 15 lần so với cây Kitaake không chuyển gen và cây đối chứng âm T1.OE-Ø_27.0.2. Trong đó dòng T1.OE-ANK1_2.7.6 đã được xác định là đồng hợp tử, còn dòng T1.OE-ANK1_2.7.5 ở thể dị hợp. Nhóm thứ hai gồm 2 dòng đồng hợp T1.OE- ANK1_24.1.3 và T1.OE-ANK1_24.1.4 có nguồn gốc từ mô sẹo chuyển gen số 24, mức độ biểu hiện của gen ANK1 tăng lần lượt 5400 và 5300 lần so với đối chứng. Nhóm thứ ba gồm 5 dòng được tái sinh từ mô sẹo chuyển gen số 9, có mức độ biểu hiện của gen ANK1 tăng từ 1000-1500 lần so với các dòng đối chứng, cả 5 dòng này
đều ở thể dị hợp tử. Biểu hiện của gen ANK1 giữa các cây đối chứng âm 27.0.2 và cây Kitaake không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (Hình 23).
Hình 23. Kết quả đánh giá mức độ biểu hiện của gen ANK1 trong các dòng chuyển gen
Với số lượng cây ít, sức sống kém, số hạt thu được từ các cây chuyển gen không nhiều, việc nghiên cứu ANK2 gặp nhiều khó khăn. Kết quả phân tích biểu hiện của gen ANK2 trong ba dòng T1.OE-ANK2_5.3.2; T1.OE-ANK2_5.3.4; T1.OE-ANK2_5.3.5 chỉ tăng từ 2-3 lần so với đối chứng (Hình 24).
Hình 24. Kết quả đánh giá mức độ biểu hiện của gen ANK2 trong các dòng chuyển gen