Để kiểm tra tính đặc hiệu của các mồi được thiết kế, chúng tôi sử dụng DNA của 5 chủng lần lượt Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii,
Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae và Escherichia coli làm
khuôn cho các phản ứng PCR sử dụng từng cặp mồi riêng biệt femA, gltA, oprL, mdh, phoA cho mỗi phản ứng. Kết quả thể hiện trên Hình 3.3.
A B
Hình 3.3. Kiểm tra khả năng nhân bản đặc hiệu của các cặp mồi femA, gltA, oprL, mdh, phoA với các chủng Staphylococcus aureus,
Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella
pneumoniae và Escherichia coli.
aeruginosa, Klebsiella pneumoniae và Escherichia coli; 7-11: PCR cặp mồi
oprL với 5 chủng Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii,
Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae và Escherichia coli; 12-16:
PCR cặp mồi mdh với 5 chủng Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae và Escherichia
coli . Hình 3.3B. 6: Thang chuẩn DNA 1 kb; 1-5: PCR cặp mồi femA với 5
chủng Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas
aeruginosa, Klebsiella pneumoniae và Escherichia coli; 7-11: PCR cặp mồi
phoA với 5 chủng Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii,
Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae và Escherichia coli.
Kết quả điện di cho thấy với mồi gltA chỉ xuất hiện băng 722 bp với khuôn là chủng Acinetobacter baumanii (Hình 3.3A đường chạy 4) Trong khi 4 đường chạy còn lại không xuất hiện băng chứng tỏ rằng mồi gltA thiết kế đặc hiệu
cho riêng chủng Acinetobacter baumanii
Tương tự, mồi oprL chỉ thấy băng 504 bp với khuôn là Pseudomonas aeruginosa (đường chạy 7 Hình 3.3A) và không thu được băng nào trong các
đường chạy sử dụng 4 chủng còn lại làm khuôn.
Mồi mdh chỉ cho băng 364 bp (Hình 3.3 A, đường chạy 14) khi sử dụng khuôn tương ứng là DNA của Klebsiella pneumonia đồng thời cũng không
xuất hiện băng khi sử dụng 4 chủng còn lại làm khuôn cho các phản ứng. Mồi femA chỉ cho băng 296 bp (Hình 3.3 B đường chạy 4) khi sử dụng khuôn là DNA của Staphylococcus aureus.
Mồi phoA chỉ xuất hiện một băng 890 bp duy nhất, là băng đặc trưng
cho kích thước của gen phoA của Escherichia coli (Hình 3.3 B đường chạy 11).
Kết quả trên chứng tỏ rằng từng cặp mồi được thiết kế đặc trưng cho từng chủng vi khuẩn quan tâm, không có khả năng bắt cặp chéo hay bắt cặp
nhầm giữa các chủng vi khuẩn khác nhau và thể hiện tính đặc hiệu cao với 5 loài vi khuẩn được nghiên cứu.