Phần 3 Vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.5. Phương pháp nghiên cứu
3.5.3. Phương pháp lây bệnh nhân tạo
Nấm F. oxysporum được nhân nuôi thuần trên môi trường PDA ở nhiệt độ 280C. Sau 7 ngày dùng slide đã khử trùng cạo nhẹ trên bề mặt để thu sợi nấm. Dung dịch nấm được pha loãng tới nồng độ 1x104 bào tử/ml và được sử dụng là dịch lây nhiễm. Hạt cà chua được trồng trong khay nhựa. Khi cây được 3-4 lá thật thì nhổ nhẹ cây, rửa sạch bộ rễ và ngâm trong dung dịch lây nhiễm nêu trên trong 20 phút. Sau đó các cây lây nhiễm được trồng trong chậu nhựa có chứa 3 kg đất khử trùng. Rễ cây nhúng trong nước cất khử trùng được sử dụng là công thức đối chứng. Toàn bộ cây thí nghiệm được đặt trong nhà kính, tưới nước, bón phân và chăm sóc cây trong điều kiện nhiệt độ từ 25-280C. Điều tra đánh giá bệnh sau 10, 20 và 30 ngày sau lây bệnh nhân tạo. Sử dụng thang bệnh 4 cấp, trong đó (i) cấp 0: cây không bị bệnh, (ii) cấp 1: cây bị bệnh nhẹ, gân lá có màu vàng nhưng lá không biến vàng, (iii) cấp 2: cây bị bệnh trung bình, lá biến vàng, (iv) cấp 3: cây bị bệnh nặng, lá rụng và cây bị héo chết.
Chỉ tiêu theo dõi
Số cây bị bệnh Tỉ lệ bệnh (%) = x 100 Tổng số cây lây bệnh n1 + 2n2 + 3n3 Chỉ số bệnh (%) = x100 N x 3
Trong đó: n1, n2 và n3: Số cây bị bệnh tại từng cấp bệnh tương ứng N: tổng số cây điều tra
- Phương pháp tính mật độ bào tử
Rót 10ml nước cất khử trùng vào hộp petri có nấm F. oxysporum thuần được nhân nuôi sau 7 ngày trên môi trường dinh dưỡng PDA ở 280C. Dùng slide khử trùng cạo nhẹ bề mặt thạch và lọc dung dịch nấm qua màng lọc. Dùng pipet chuyển dung dịch nấm sang buồng đếm hồng cầu Neuvour. Mật độ bào tử /ml
được tính theo công thức: A = (n x 10)/4 x D. Trong đó: A : số bào tử / ml, n: Số bào tử trung bình trong 5 ô đếm, D: nồng độ pha loãng.