Phần 4 Kết quả nghiên cứu và thảo luận
4.1. Phân lập nấm F.oxysporum từ mẫu cây cà chua bị bệnh héo vàng thu
BỆNH HÉO VÀNG THU THẬP NGOÀI ĐỒNG RUỘNG
Hình 4.1. Bệnh héo vàng trên cây cà chua (Fusarium oxysporum)
Triệu chứng bệnh héo rũ cây cà chua: Cây con bị bệnh còi cọc, kém phát triển, sau bị chết. Cây trưởng thành bị bệnh các lá phía dưới gốc thường biến vàng, ban đầu từ một số lá chét phía bên cây, sau đó lan ra toàn cây, lá héo rũ, màu vàng, không bị rụng. Vết bệnh ở trên thân sát mặt đất hoặc cổ rễ màu nâu, vết bệnh lớn dần làm khô tóp cả đoạn thân sát mặt đất, bộ rễ phát triển kém, rễ bị thối dần. Khi trời ẩm, trên mặt vết bệnh có lớp nấm màu hồng nhạt, chẻ dọc thân thấy bó mạch libe có màu nâu. Cây bị bệnh ban ngày héo, ban đêm phục hồi, cây sinh trưởng kém, sau một thời gian cây sẽ chết hoàn toàn.
4.1.1. Phân lập nấm Fusarium oxysporum từ mẫu bệnh héo vàng
Các mẫu thân cà chua bị bệnh héo rũ và đất tại vùng cây bị bệnh đã được thu thập từ các vùng điều tra và phân lập trong phòng thí nghiệm. Kết quả phân lập được trình bày ở Bảng 4.1.
Bảng 4.1. Phân lập nấm Fusarium oxysporum từ mẫu cây cà chua bị bệnh héo vàng
Địa điểm thu
mẫu Cây trồng
Số mẫu phân lập
Số mẫu xuất hiện
F. oxysporum Tỷ lệ % Hà nội Cà chua 20 16 80 Vĩnh Phúc Cà chua 20 12 60 Bắc Ninh Cà chua 20 14 70 Hải Phòng Cà chua 20 15 75 Tổng số mẫu phân lập 80 57 71,25
Kết quả phân lập mẫu bệnh được thu thập tại Hà nội và các vùng phụ cận cho thấy trong số 80 mẫu bệnh được phân lập có 57 mẫu có sự xuất hiện nấm F.
oxysporum, chiếm tỉ lệ 71,25% trong đó hai dòng nấm thu thập tại Hà Nội
Đặc điểm cấu tạo nấm F. oxysporum: trên môi trường PDA, tản nấm thường sinh sắc tố trắng, đến hồng, rồi chuyển tím đậm. Bào tử lớn hình thành trên môi trường PDA có kích thước ngắn, trung bình hoặc dài, phần lớn có 3 vách ngăn mỏng, một đầu nhọn hoặc thon nhọn, một đầu hình bàn chân, bào tử nhỏ hình thành trên cành bào tử phân sinh đơn nhánh ngắn thường không có ngăn ngang, đôi khi có một ngăn. Hình dạng bào tử thay đổi từ hình ovan, hình elip hoặc hình quả thận. Hậu bào tử thường hình thành hầu hết trên các mẫu phân lập sau 3 – 6 tuần nuôi cấy trên bề mặt thạch của môi trường.
Trong quá trình phân lập dựa vào đặc điểm phát triển trên môi trường nhân tạo chúng tôi chọn 2 dòng nấm F.oxysporum ( FH1 và FH15) thu tại Hà Nội có độc tính mạnh nhất làm thuần và bảo quản để phục vụ cho các thí nghiệm tiếp theo.
4.1.2 Xác định tác nhân gây bệnh qua lây bệnh nhân tạo
Nấm Fusarium là loài nấm đa thực, tồn tại trong môi trường ở nhiều nơi,
có thể trong đất và trên các bộ phận của cây. Nguyên tắc KOCH’s đã được sử dụng để xác định tác nhân gây bệnh héo vàng trên cà chua. Các isolates nấm sau khi được phân lập đã được lây bệnh nhân tạo trên cà chua trong nhà lưới và phân lập trở lại trong phòng thí nghiệm. Kết quả thí nghiệm được thể hiện trong Bảng 4.2.
Bảng 4.2. Kết quả lây bệnh nhân tạo và phân lập trở lại nấm F. oxysporum trên cây cà chua
Cà chua Mật độ bào tử/ml Số cây xuất hiện triệu chứng Tỉ lệ (%) Số mô phân lập Số mô xuất hiện nấm F. oxysporum Tỉ lệ (%) 20 cây lây bệnh 104 16 80 40 mô bệnh 40 100 20 cây đối chứng (phun nước cất) 0 0 0 40 mô khỏe 0 0
Kết quả theo dõi cho thấy sau lây nhiễm 10 ngày trên cây cà chua được lây bệnh nhân tạo đã xuất hiện triệu chứng lá bị vàng. Sau 30 ngày đã có cây héo và lá dưới rụng. Tỉ lệ cây cà chua bị nhiễm bệnh là 80%. Các cây ở công thức đối chứng phát triển bình thường, không có triệu chứng vàng lá hay héo cây. Sau lây bệnh 40 ngày, các mẫu cây bị bệnh được phân lập trong phòng thí nghiệm, kiểm tra hình thái nấm và khuẩn lạc để xác định chính xác dòng nấm gây bệnh héo vàng cà chua. Các chủng nấm này được bảo quản trong phòng thí nghiệm để phục vụ cho các công việc tiếp theo.