Phần 3 Đối tượng, nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.2.Đối tượng nghiên cứu
3.2.1. Bò sữa
Bò sữa được nuôi tại các nông hộ thuộc các xã (Vĩnh Thịnh, An Tường, Vĩnh Ninh) huyện Vĩnh Tường, tỉnh Vĩnh Phúc.
3.2.2. Cao khô dược liệu Sài đất
Thân lá cây Sài đất (Wedelia calendulaceae Less), khô đã qua sơ chế được thu mua. Sơ chế lá theo quy trình sau: Cây tươi thu hái về được rửa dưới vòi nước sạch (2-3 lần) sau đó được sấy hoặc phơi khô ở 400C. Mẫu khô được nghiền thành bột mịn (<0,5mm). Bột lá đựng trong túi nilong bảo quản trong bình hút ẩm.
Bột dược liệu Sài đất được chiết với các dung môi bằng phương pháp ngâm chiết ở nhiệt độ phòng với cùng một tỷ lệ (5g bột dược liệu/50ml dung môi), mỗi ngày được lắc đảo 2 lần. Sau 72 giờ thu dịch chiết lọc qua vải màn và giấy lọc Whatman No.1. Thu dịch chiết đem cô, quay hút chân không để loại bỏ hoàn toàn dung môi. Tới khi khối lượng của bình cô quay không đổi đem cân để tính hiệu suất tách chiết của các dung môi. Cao cô toàn phần đã loại bỏ hết dung môi bảo quản trong tủ mát 40C để thử hoạt tính và khả năng ức chế vi khuẩn.
3.2.3. Vi khuẩn nghiên cứu
- Vi khuẩn Staphylococus spp. và Streptococus spp. phân lập từ dịch viêm tử cung bò được cung cấp từ phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Sinh học Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam (LAS – NN54; ISO 17025:2005).
3.2.4. Nano bạc
- Nano bạc có nồng độ gốc 100ppm, 90% các hạt nano bạc có kích thước 20 - 25 nm do bộ môn Sinh học khoa Công nghệ sinh học cung cấp.
3.2.5. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất thí nghiệm 3.2.5.1. Thiết bị, dụng cụ 3.2.5.1. Thiết bị, dụng cụ
Các thiết bị sử dụng trong quá trình thí nghiệm gồm có: tủ sấy, lò v sóng; tủ ấm nuôi vi khuẩn, tủ nuô v khuẩn lỏng lắc; cân phân tích; nồi hấp khử trùng autoclave; box cấy vô trùng; máy đo pH, máy l tâm, máy đo quang phổ, máy cô quay chân không.
Một số dụng cụ cần thiết như: Bình ống nghiệm, pipet man, đĩa petri, ống nghiệm, eppendof, đèn cồn, cốc thủy t nh, g á ống ngh ệm, bình định mức, ống ngh ệm.
3.2.5.2. Hóa chất - môi trường
+ Hóa chất
Các dung môi chiết: axit acetic 5%, ethanol 35%, ethanol 70%, ethanol 96%, nước cất, aceton nitril 50%, aceton nitril 100%.
Dung môi pha chất tan : Dimethyl sulphoxit (DMSO).
Các hóa chất định tính một số thành phần hóa học trong dịch chiết.
+ Môi trường Luria–Bertani (Gilbert) dạng lỏng, được hấp tiệt trùng trong các bình tam giác.
+ Môi trường LB rắn, được hấp tiệt trùng để nguội tới 400- 500C, đổ vào đĩa petri có đường kính 10 cm, với độ dày là 4 ± 0,2 mm.