Các mẫu được lấy theo quy định.
Mẫu cơ quan tổ chức cần lấy đúng (lấy đúng cơ quan, đúng vùng tổn thương điển hình), lấy đủ (đủ thành phần cấu tạo cần nghiên cứu và đủ lượng cấn thiết).
Mẫu có thể là dịch mũi, dịch hầu họng và dịch khí quản và dịch phế quản của gà mắc bệnh ở mọi lứa tuổi. Ta có thể lấy mẫu theo phương pháp sau:
- Đối với dịch mũi và dịch ngoáy hầu họng dùng tăm bông vô trùng lấy dịch mũi, hầu họng của gà bệnh đã được lau sạch bằng cồn 70° để một thời gian cho dịch mũi thấm vào tăm bôn. Để tăm bông vào ống nghiệm chứa môi trường vận chuyển (Stuart TranspORT Medium), môi trường nước thịt vô trùng hoặc dung dịch PBS (dung dịch muối đệm phosphat), đậy nút và ghi nhãn rồi đưa về phòng thí nghiệm sau 2 - 8h; các cơ quan hoặc bộ phận ngâm trong formon 10% để làm tiêu bản bệnh lý. Nếu ở xa phòng thí nghiệm thì môi trường vận chuyển phải để ở tủ lạnh. Sau vận chuyển bệnh phẩm phải được cấy vào môi trường phân lập thích hợp.
- Đối với dịch khí quản hay dịch phế quản: dùng kéo vô trùng cắt dọc khí quản hay phế quản, sau đó dùng tăm bông vô trùng đưa dọc theo đường ống để lấy dịch. Đặt tăm bông vào trong môi trường như trên, đậy nút ghi nhãn và vận chuyển về phòng thí nghiệm.
- Với mẫu là tổ chức phổi: sau khi mổ khám gà, dùng kéo vô trùng cắt lấy tổ chức phổi ở vùng định xét nghiệm cho và túi zip và bảo quản tương tự như trên.
3.5.4. Phương pháp nuôi cấy và phân lập vi khuẩn
Mẫu bệnh phẩm được nuôi cấy trên môi trường thạch máu Columbia Blood Aagar Base (CBA) đã bổ sung 10μg/ml gentamycin hoặc bổ sung 5μg/ml gentamycin và polymycin B, ủ 37°C, 5% CO2, ở điều kiện hiếu khí trong thời gian 24 - 48 giờ.
Lựa chọn khuẩn lạc nghi ngờ cấy chuyển sang môi trường tương tự hoặc tăng sinh trên môi trường Brain Heart Broth (BHB) để thử một số đặc tính sinh hóa: Catalase; Oxidase; Kovac’s/Indol; một số phản ứng lên men đường: Sucrose, Lactose, Glucose…; phản ứng phân giải Urê…
Phản ứng thử Oxydase: tiến hành trên giấy được tẩm dung dịch Oxidase (Remel). Dùng que cấy vô trùng cấy khuẩn lạc từ môi trường thạch dàn đều trên mặt giấy đã thấm thuốc thử. Nếu thấy xuất hiện màu tím đen (giấy đổi màu có thể màu xanh) sau 10 giây là phản ứng dương tính. Nếu không xuất hiện màu tím đen hay giấy không đổi màu là phản ứng âm tính.
Phản ứng Catalase: dùng que cấy vô trùng lấy khuẩn lạc từ môi trường thạch đặt lên một điểm trên phiến kính sạch, nhỏ một giọt dung dịch oxy già (H2O2 3%) lên, trộn đều. Nếu có hiện tượng sủi bọt là phản ứng dương tính, nếu không thấy sủi bọt là phản ứng âm tính. ORT có phản ứng Catalase âm tính
Phản ứng Indol: dùng để phát hiện vi khuẩn có enzym trytophanasa chuyển hóa trypton thành indol. Cấy vi khuẩn vào nước trypton và ủ ở 37ºC/ 24 giờ. Nhỏ vài giọt thuốc thử Kovac’s, phản ứng dương tính có vòng màu đỏ cánh sen nổi lên trên (do indol kết hợp với p-dimethylaminnobelzal dehyde trong thuốc thử Kovac’s), nếu không có màu hoặc màu vàng là phản ứng âm tính.
Phản ứng phân giải Urê: phát hiện enzym ureasa phân giải urea thành amonia và cacbodioxide. Amonia sinh ra làm kiềm hóa môi trường. Cấy vi khuẩn vào canh thang ure, ủ 37ºC/ 24- 48 giờ. Phản ứng dương tính: môi trường có màu tím đỏ; phản ứng âm tính: không màu...