Phần 3 Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
3.5. Phương pháp nghiên cứu
3.5.7. Phương pháp chẩn đoán nhanh PEDV bằng PED-Ag test kit
Nguyên lý: Bộ kít này dựa trên nguyên lý kỹ thuật sắc ký miễn dịch sử
dụng phương pháp Direct Sandwich.
Hai kháng thể (KT) đơn dòng trong thiết bị kết hợp đặc thù với các khu quyết định kháng nguyên khác nhau của kháng nguyên cần chẩn đoán. Sau khi cho bệnh phẩm thấm vào vị trí đệm cellulose của thiết bị, các kháng nguyên của virus PED sẽ di chuyển và kết hợp với hợp chất thể keo màu vàng chứa kháng thể đơn dòng kháng virus PED, để tạo thành phức chất ‘KT-KN’. Sau đó, phức hợp này kết hợp với kháng thể đơn dòng kháng virus PED khác trong màng nitơ- cellulose của thiết bị, để tạo thành phức chất kẹp hoàn chỉnh ‘KT-KN-KT’ (“Ab- Ag-Ab” direct sandwich].
Tất cả các thành phần có trong test bao gồm - Dung dịch pha loãng.
- Tăm bông.
- Dụng cụ thử cho kết quả.
Được lấy ra và để ở nơi bằng phẳng, sạch sẽ, thoáng mát.
Chuẩn bị mẫu
Lấy mẫu phân (để thăm dò sự hiện diện của virus PED) được thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất của bộ kit PED-Ag test kit. (Hình 3.1A)
Thực hiện theo các bước
1. Sử dụng que tăm bông trong test kit để lấy mẫu phân tại trực tràng của lợn. 2. Cho que tăm bông vào lọ mẫu có chứa 1ml dung dịch pha loãng (được cung cấp trong bộ test kit).
3. Khuấy xoay tròn que tăm bông trong dung dịch pha loãng đến khi phân tan hết (khoảng 10 giây).
4. Lấy dụng cụ xét nghiệm trong túi bạc, đặt ở nơi bằng phẳng và khô ráo. 5. Sử dụng ống nhỏ giọt có sẵn, rút lấy dung dịch trong lọ mẫu đã được hòa lẫn với phân ở trên.
6. Nhỏ 4-5 giọt dung dịch trong lọ mẫu đã hòa lẫn vào lỗ tròn trên dụng cụ thử nghiệm.
7. Phản ứng xảy ra khi có đường màu tím chạy dọc trên bảng kết quả (nằm ở giữa dụng cụ xét nghiệm) ngay cạnh lỗ tròn chứa dung dịch bệnh phẩm.
Sau 1 phút nếu không thấy có sự di chuyển của màu tím, nhỏ thêm 1 giọt dung dịch bệnh phẩm.
8. Đọc kết quả 5-10 phút.
Đọc kết quả
-Ở phía bên trái trong giếng kết quả, một thanh màu xuất hiện (tại chữ C),
có nghĩa là các bước thực hiện phản ứng đúng cách. Kết quả dương tính khi có thêm 1 thanh màu xuất hiện bên phải (tại chữ T) trong giếng kết quả (Hình 3.1B)
-Ở phía bên trái trong giếng kết quả, không có xuất hiện thanh màu nào, có
nghĩa thao tác thực hiện không đúng, không thực hiện đúng hướng dẫn đã quy định. Do đó, phản ứng phải được thực hiện lại.
A: Thao tác thực hiện B: Đọc kết quả
Hình 3. 1. Kỹ thuật kiểm tra PEDV bằng kít test nhanh
Nguồn: Nguyễn Thanh Phong (2015)