3.5.1. Phương pháp khám buồng trứng
Sử dụng phương pháp khám qua trực tràng, đánh giá buồng trứng dựa vào hình thái buồng trứng và các thông tin liên quan đến sinh sản đàn bò. Một tay đeo găng sản khoa và bôi trơn, nhẹ nhàng đưa vào trực tràng của bò và moi hết phân, lần tìm buồng trứng và kiểm tra đánh giá buồng trứng theo cảm nhận tay.
Hình 3.1. Phương pháp khám buồng trứng qua trực tràng
Bệnh thể vàng tồn lưu
Thể vàng không bị thoái hóa và chu kỳ động dục không được biểu hiện. Nguyên nhân có thể do nhiều yếu tố gồm tử cung viêm tích mủ, dịch nhầy trong tử cung, thai chết lưu (phù thai), thai gỗ…Khám qua trực tràng tìm buồng trứng, dùng ngón tay cái thoa nhẹ trên bề mặt buồng trứng thấy có 1 khối nhỏ (bằng hạt ngô, đậu tương, hạt lạc…) nhô lên khỏi bề mặt buồng trứng, cứng, có chân đế, ranh giới giữa thể vàng và bề mặt buồng trứng rõ (Sử Thanh Long và cs., 2014).
Bệnh u nang buồng trứng
Là những nang trứng không rụng và lưu lại lâu trên buồng trứng, đường kính lớn hơn 2,5cm. Bò bị u nang thường biểu hiện động dục thường xuyên và liên tục không theo chu kỳ. Tiến hành sờ khám qua trực tràng thấy buồng trứng to hơn bình thường (bằng quả trứng gà), sờ trên bề mặt buồng trứng thấy có một u nang (hoặc nhiều hơn) cảm giác mềm, dễ vỡ và có vách ngăn không rõ ràng (Sử Thanh Long và cs., 2014).
Buồng trứng không hoạt động
Buồng trứng có hình thái dẹt, cứng, nhỏ, không cân đối (một bên to, một bên nhỏ) và bề mặt buồng trứng trơn nhẵn không có thể vàng và không có nang trứng. Bò không xuất hiện chu kỳ động dục và thường gặp ở những con có thể trạng gầy yếu, suy dinh dưỡng (Sử Thanh Long và cs., 2014). Để kết luận bò bị bệnh buống trứng ta tiến hành kiểm tra buồng trứng.
Dưới đây là bảng kết quả chẩn đoán bệnh buồng trứng sau hai lần kiểm tra.
Bảng 3.1. Phương pháp chẩn đoán bệnh buồng trứng
Kiểm tra buồng trứng
Lần 1 Ngày thứ nhất
Lần 2
7-10 ngày sau Kết luận buồng trứng
Thể vàng + - + + + - Thể vàng tồn lưu Sinh lý bình thường Sinh lý bình thường Nang trứng + - + + + - U nang buồng trứng Sinh lý bình thường Sinh lý bình thường
Buồng trứng - - Không hoạt động
3.5.2. Phương pháp đánh giá điểm thể trạng
Dựa vào cảm nhận bằng tay và quan sát bằng mắt thường độ tích lũy mỡ ở các gò xương (bony promiences) vùng lưng và vùng chậu, bao gồm: mỏm ngang và mỏm gai của đốt sống lưng (1), u ngồi (ischial tuberosity) và lồi củ chậu (iliac tuberosity), gốc đuôi (tail head) và vùng hõm hông (thurl region).
Thang điểm đánh giá từ 1 đến 5 (1: rất gầy, 2: gầy, 3: bình thường, 4: béo, 5: rất béo), hai mức điểm liên tiếp cách nhau 0,25 (Ferguson et al.,1994).
3.5.3. Phương pháp đánh giá lứa đẻ
Các bò chưa động dục, động dục nhiều lần mà thụ tinh nhân tạo không có chửa xếp vào bò tơ. Các bò có thai trên 3 tháng bị sảy tính là 1 lứa đẻ.
3.5.4. Phương pháp đặt vòng mẫu tẩm progesterone
Bước 1: Chuẩn bị bò
- Bò cái không động dục trở lại trong vòng 90 ngày sau đẻ và không mắc các bệnh truyền nhiễm, bệnh nội khoa, bệnh ký sinh trùng.
- Khám cơ quan sinh dục không viêm nhiễm, không dị hình, không có nước tiểu trong âm đạo.
Bước 2: Chuẩn bị dụng cụ và vòng
- Vòng tẩm progesterone (ProB) do Việt Nam sản xuất hoặc vòng CIDR (Newzeland);
- Dụng cụ đặt vòng (applicator) đã được vô trùng.
- Găng tay cao su, bông vô trùng, cồn iodine, cồn 70°, dây buộc đuôi, xô nhựa, gáo nhựa…
Bước 3: Cố định và vệ sinh cơ quan sinh dục bò
- Cố định bò theo các phương pháp khác nhau tuỳ theo điều kiện thực tế (giữ mũi, cố định đầu, đưa vào gióng,…) để đảm bảo an toàn cho người thực hiện.
- Cố định đuôi có thể bằng cách dùng dây buộc đuôi vắt chéo qua mông và cố định đầu dây bên kia qua chân trước để cơ quan sinh dục được bộc lộ ra ngoài.
- Dùng nước pha với thuốc sát trùng, rửa cơ quan sinh dục bên ngoài. - Dùng giấy thấm nước lau khô cơ quan sinh dục ngoài (mép âm môn, âm hộ), rồi dùng cồn Iodine xịt cơ quan sinh dục bên ngoài, sau đó dùng bông cồn lau khô.
Bước 4: Đặt vòng tẩm progesterone
- Mang găng tay khi thực hiện thao tác với vòng;
- Chuẩn bị nước sạch và dung dịch diệt khuẩn để khử trùng dụng cụ đặt vòng tẩm trước và sau mỗi lần sử dụng;
- Tay trái cầm vòng tẩm và khép hai cánh vòng lại thành một đường thẳng và đặt vào lòng của dụng cụ đặt, ép hai cánh vòng vào nhau rồi đẩy xuống sao cho vòng và dụng cụ đặt vòng khít vào nhau.
- Mở mép âm môn, nhẹ nhàng đưa dụng cụ đặt vào, hướng lên phía trên đi qua khung xương chậu đến khi bị chặn lại, rồi hướng xuống dưới, sau đó xoay dụng cụ đặt sao cho phần dây của vòng đi xuống phía dưới thuận với chiều đuôi bò.
- Đưa dụng cụ đặt vòng nhẹ nhàng từ từ vào âm đạo bò theo nhu động âm môn, ép bộ phận pitton của dụng cụ đặt để đẩy vòng tẩm vào âm đạo bò;
- Dùng kéo cắt ngắn phần dây của vòng tẩm, để nhô ra cách mép âm môn 2 - 3cm để tránh sự thu hút của bò khác;
Bước 5: Rút vòng tẩm progesterone
đỡ mép âm môn, tay phải kéo ra từ từ, kiểm tra, đánh giá đặc tính dịch đường sinh dục bám tại 2 cánh vòng và thân vòng.
- Xương vòng đã sử dụng được xử lý theo quy trình để tái sản xuất.
3.5.5. Phương pháp đánh giá tính kích ứng vòng ProB và CIDR sau rút vòng
Để đánh giá mức mức độ kích ứng của vòng tẩm progesterone (ProB và CIDR) đặt âm đạo bò. Sau khi rút vòng, chúng tôi tiến hành quan sát dịch bám dính ở thân, cánh vòng (bảng 3.2).
Bảng 3.2. Mức độ kích ứng của vòng ProB và CIDR sau rút vòng
Mức độ Biểu hiện
+ (bình thường)
Dịch nhày trong, không có mùi hay có thể vẩn lạ bám ở thân hoặc một cánh của vòng;
Đường sinh dục của bò bình thường (không có dịch viêm, niêm mạc màu hồng nhạt).
++ (kích ứng nhẹ)
Dịch nhày trong, không có mùi, có thể vẩn lạ bám ở thân và 1 cánh của vòng hoặc hai cánh của vòng;
Đường sinh dục của bò bình thường (không có dịch viêm, niêm mạc màu hồng nhạt).
+++ (viêm nhẹ)
Dịch màu trắng đục, có thể vẩn bám ở cả thân và hai cánh của vòng Đường sinh dục của bò có hiện tượng viêm nhẹ.
++++ (viêm nặng)
Dịch viêm, có màu sắc và mùi lạ, có thể lẫn cả máu bám bất kỳ vị trí nào của vòng;
Đường sinh dục của bò có hiện tượng viêm.
3.5.6. Phương pháp phát hiện bò động dục
Quan sát ngày 2 lần (sáng, chiều) kết hợp hỏi chủ gia súc về những biểu hiện của gia súc. Để cho việc phát hiện bò sữa động dục được tốt và hiệu quả cần phải có sổ sách ghi chép các số liệu sinh sản của mỗi bò gồm tuổi, ngày đẻ, lứa đẻ, lần động du ̣c gần nhất. Quan sát để phát hiện động dục với tần suất ba lần trong trên ngày (sáng, trưa, tối) tốt nhất là quan sát vào sáng sớm và chiều tối. Thời gian quan sát phụ thuộc vào số lượng gia súc trong đàn, thông thường mỗi lần từ 15 đến 30 phút.
Biểu hiện bò động dục: Bò ít ăn, giảm sữa, hay nhìn ngó, kêu rống, thích gần hít ngửi âm hộ và nhảy lên lưng con khác hoặc để con khác nhảy lên (nếu con ở dưới đứng yên thì bản thân con đó đang đô ̣ng du ̣c, nếu con ở dưới chạy thì con nhảy là con đô ̣ng du ̣c trừ trường hợp cả hai con đều đô ̣ng du ̣c). Ngoài ra, âm
hộ sưng đỏ, chảy nước nhờn trong, lỏng sau đặc dần, kiểm tra bên trong thấy tử cung cứng hơn bình thường.
3.6. BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM
Thí nghiệm được tiến hành trên 100 bò sữa HF thuộc các nông hộ và trang trại tại Ba Vì, với 100 bò chúng tôi chia ngẫu nhiên thành 2 lô: lô 1 gồm 50 bò sử dụng vòng ProB và lô 2 còn lại 50 bò sử dụng vòng CIDR. Tất cả các bò được gây động dục theo công thức Ovsynch kết hợp vòng tẩm progesterone (trong hình 3.1 và 3.2).
Lô thí nghiệm 1:
Hình 3.2. Công thức gây động dục bò sử dụng vòng ProB
Tiến hành gây động dục chủ động bằng cách, ngày đầu tiên tiêm 1ml GnRH (Ovurelin, Bayer - Việt Nam) kết hợp 5ml ADE (Bayer, Việt Nam). Vệ sinh cơ quan sinh dục bên ngoài bằng nước sát trùng Verkon sau đó tiến hành sát trùng bằng Iodine 2% trước khi đặt vòng ProB. Đến ngày thứ 7 tiến hành rút vòng ProB đồng thời tiêm 2ml PGF2α (Ovuprost, Bayer - Việt Nam), 24 giờ sau tiêm nhắc lại 1ml GnRH (Ovurelin, Bayer - Việt Nam) và quan sát biểu hiện động dục trên bò thí nghiệm vào các ngày tiếp theo. Nếu bò động dục, tiến hành thực hiện TTNT hai lần theo quy tắc sáng - chiều.
Lô thí nghiệm 2:
Ngày đầu tiên tiến hành đặt vòng CIDR (chứa 1.38 gr progesterone) vào âm đạo bò đồng thời tiêm tiêm GnRH (1ml) kết hợp tiêm vitamin ADE (5ml). Vệ sinh cơ quan sinh dục bên ngoài bằng nước sát trùng Verkon sau đó tiến hành sát trùng bằng cồn Iodine 2% trước khi đặt vòng CIDR. đến ngày thứ 7 rút vòng, tiến hành tiên PGF2α (2ml) và vitamin ADE (5ml), ngày thứ 8 tiêm GnRH (1ml). Ở thí nghiệm này chúng tôi theo dõi bò động dục trong 3 ngày kể từ ngày rút vòng.
3.7. XỬ LÝ SỐ LIỆU
Số liệu được xử lý theo phương pháp thống kê sinh học bằng phần mềm Excel, Minitab. Sự sai khác chỉ có ý nghĩa thống kê khi P<0,05.
Phương pháp tính tỷ lệ động dục:
PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. KẾT QUẢ GÂY ĐỘNG DỤC BẰNG VÒNG PROB VÀ CIDR
Ba Vì là địa phương có nhiều kinh nghiệm và kỹ năng trong chăn nuôi bò sữa. Tuy nhiên, cùng với sự gia tăng sản lượng sữa, khả năng sinh sản của đàn bò ngày càng kém hơn. Một trong những nguyên nhân của vấn đề này là do ở những bò cao sản, nhu cầu thu nhận năng lượng và protein sẽ cao hơn, khiến cho tỷ lệ chuyển hoá một số hormone steroid có vai trò quan trọng trong điều khiển chu kỳ sinh sản như progesterone thiết hụt, dẫn tới hiện tượng không rụng trứng, tỷ lệ có chửa sau khi TTNT thấp làm kéo dài khoảng cách lứa đẻ (Vukovic et al., 2016). Ngoài ra, sự thay đổi của quá trình chuyển hoá trong dịch nang trứng của các nang trội vào giai đoạn đầu của kỳ sữa cũng góp phần khiến tăng số lần thụ tinh có chửa, giảm tỷ lệ chửa (Yusuf et al., 2010). Do vậy việc gây động dục trở lại và đồng bộ hóa động dục trên đàn bò hết sức cần thiết. Hiện nay, đồng bộ hóa động dục ở cả bò thịt và bò sữa đã được thực hiện với progestin (Zimbleman và Smith, 1966; Wiltbank và Gonzalez-Padilla, 1975), prostaglandin F2α (PGF2α; Lauderdale, 1972; Lauderdale et al, 1974), và sự kết hợp của các hormone này với các kích tố khác (Odde, 1990; Patterson et al, 2003). Sử dụng thiết bị có chứa progesterone (P4) đặt âm đạo cùng với PGF2α đã đồng bộ hóa hiệu quả động dục và giảm khoảng thời gian động dục ở bò thịt và bò sữa (Lucy et al., 2001).
Trong nghiên cứu của Iwakuma et al. (2007), tỷ lệ có chửa của nhóm thí nghiệm (Ovsynch + vòng CIDR) cho tỷ lệ có chửa cao hơn hẳn so với nhóm thí nghiệm (Ovsynch), và nhóm thí nghiệm (EB + Heatsynch). Gây rụng trứng đồng pha và thụ tinh nhân tạo cố định thời gian, không cần quan sát và phát hiện thời điểm động dục, trên bò lần đầu tiên được giới thiệu vào năm 1995 (Pursley et al., 1995). Các công thức này được xây dựng dựa trên tổ hợp hormone sinh sản GnRH (sử dụng vào ngày 0 và ngày 9), PGF vào ngày thứ 7, thụ tinh nhân tạo được thựa hiện sau 16 - 20h tính từ lần sử dụng GnRH thứ hai. Ngay sau đó, các công thức Co-synch [GnRH-7 ngày-PGF2α-2 ngày- GnRH và thụ tinh nhân tạo] (Geary et al., 1998), Heat-synch [GnRH-7 ngày- PGF2α-1 ngày-estradiol cypionate-2 ngày-thụ tinh nhân tạo] (Pancarci et al., 2002) và những công thức biến đổi đã được xây dựng đáp ứng nhu cầu phát triển của ngành chăn nuôi bò trên toàn thế giới. Do đó, khi thực hiện nội dung nghiên cứu ứng dụng vòng tẩm progesterone (vòng ProB) do Việt Nam sản xuất, nhóm tác giả quyết định thực hiện kết hợp với phác đồ Ovsynch, để phù hợp nhất với điều kiện thực tiễn sản
xuất của người chăn nuôi bò sữa.
Bảng 4.1. Kết quả bò động dục sau rút vòng ProB và CIDR
Dạng vòng Số bò thí nghiệm (con) Số bò động dục (con) Tỷ lệ (%) ProB 50 41 82,0a CIDR 50 39 78,0b (Pa, b > 0.05)
Biểu đồ 4.1. Tỷ lệ bò động dục trở lại sau khi rút vòng
Qua bảng 4.1 và biểu đồ 4.1, cho thấy tỷ lệ bò động dục khi sử dụng vòng ProB là 82,0% (41/50) cao hơn tỷ lệ bò động khi sử dụng vòng CIDR là 78,0% (39/50) (P>0,05), kết quả cho thấy tỷ lệ động dục giữa hai nhóm bò thí nghiệm dựa trên phác đồ sử dụng vòng ProB và vòng CIDR không khác nhau.
Kết quả này cao hơn so với một số nghiên cứu tương tự khi ứng dụng tổ hợp hormone ngoại lai để gây động dục chủ động trên đàn bò sữa, Ion Caraba (2013) đã so sánh hiểu quả điều trị khi sử dụng 2 phương pháp Ovsynch và Cosynch trên đàn bò sữa cho tỷ lệ động dục lần lượt là 63% và 57%. Nghiên cứu của Chebal et al. (2006), bò chậm động dục sau khi sử dụng thiết bị đặt âm đạo trong vòng 7 ngày cho tỷ lệ rụng trứng đạt 30 - 46%, trong khi đó kết hợp đặt vòng CIDR (7 hoặc 8 ngày) đồng thời tiêm estradiol benzoate vào thời điểm bắt
82 78 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 ProB CIDR Tỷ lệ % Dạng vòng
đầu điều trị và tiêm lặp lại sau 24 giờ kể từ khi rút vòng cho tỷ lệ động dục hơn 90%, tỷ lệ rụng trứng 80% (Rhodes et al., 2003).
Các giao thức dựa trên GnRH đã được sử dụng rộng rãi ở bò sữa và bò thịt. Bổ sung hormone GnRH ngoại sinh giúp ức chế sự phát triển của nang trứng hiện tại và cho phép phát triển sóng nang mới vào một đến hai ngày sau đó. Với bò có nang trưởng thành (đường kính lớn hơn 10 mm), việc điều trị bằng GnRH gây ra sự tăng tiết LH và rụng trứng. Ngày thứ 7 rút vòng đồng thời tiêm PGF2α, nhằm loại bỏ nguồn progesterone nội sinh tiềm năng và ngoại sinh vì PGF2α làm thoái hóa thể vàng, rút ngắn pha thể vàng và tạo điều kiện thuận lợi cho phát triển nang trứng tiếp theo. Nếu chỉ sử dụng PGF2α điều trị chậm động dục trên bò thì yêu cầu phát hiện động dục, nhưng dấu hiệu động dục ở bò sữa giai đoạn sau sinh biểu hiện ít rõ ràng hơn (Westwood et al., 2002) do bò giai đoạn sau sinh thường rơi vào trạng thái cân bằng năng lượng âm. Bò mắc các bệnh buồng trứng dẫn tới rối loạn hormone, không xác định chính xác giai đoạn chu kỳ buồng trứng, chính vì vậy thời điểm rút vòng tương ứng với giai đoạn cuối của pha thể vàng, nồng độ progesterone giảm nên tiêm PGF2α sẽ tác động lên nang mới hình thành và gây rụng trứng, đặc biệt khi tiêm mũi GnRH thứ hai vào 36 đến 48 giờ sau PGF2α càng thúc đẩy tỷ lệ rụng trứng. Thụ tinh cố định thời gian (TAI) được khuyến cáo thực hiện sau khi tiêm GnRH thứ hai 16 đến 20 giờ.
Sử dụng progesterone ngoại sinh (chèn vòng CIDR) điều hòa chu kỳ động dục, tác động feedback ngược lên vùng dưới đồi, làm giảm tiết GnRH kích thích tuyên yên giảm tiết LH (cả FSH), do đó nang trứng không thể rụng. Nồng độ progesterone trong huyết thanh phải đạt được trên 1ng/ml mới có thể xảy ra rụng trứng và động dục (Lucy, 2004). Bổ sung progesterone từ ngày 14 đến 21 ngày sẽ cho tỷ lệ động dục cao trong 3 ngày sau khi rút vòng (Macmilan et al., 1993).
Hiện nay, vòng tẩm P4 được sử dụng phổ biến ở các trang trại chăn nuôi bò sữa do hiệu quả đã được công nhận trong điều trị bò không rụng trứng