3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài nghiên cứu
2.3.1 Thiết bị dụng cụ và hóa chất
2.3.1.1. Thiết bị
Hệ thống sắc ký lỏng ghép khối phổ đầu dò 3 tứ cực (Agilent 6410 Triple quad LC/MS/MS) bao gồm hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao LC1200 (thiết bị bơm mẫu tự động - HiP - ALS kèm bộ phận điều chỉnh nhiệt độ - FC/ALS, bơm áp suất cao - Binary SL, bộ phận loại khí - degasser, cột phân tích) và đầu dò khối phổ.
*Nguyên tắc hoạt động:
Sau khi được tách trong hệ thống sắc ký lỏng, mẫu cần phân tích sẽ đi qua một ống dẫn đến đầu dò MS. Tại đây diễn ra quá trình ion hóa trong buồng API với kiểu ESI, APCI hoặc APPI. Ion sinh ra được tập trung và gia tốc bằng hệ quang học ion để đưa vào bộ phân tích khối. Tại bộ phân tích khối, tứ cực thứ nhất sẽ chọn ion mẹ có m/z xác định, các phân mảnh của ion này được tạo ra tại buồng va chạm (collision cell) nhờ tương tác với khí trơ và được phân tích nhờ tứ cực thứ ba, tạo ra tín hiệu đặc trưng tại bộ phận phát hiện ion.
*Cấu tạo đầu dò khối phổ ba tứ cực:
Đầu dò khối phổ ba tứ cực bao gồm 4 bộ phận chính sau:
+ Nguồn ion hóa tại áp suất khí quyển: đầu dò khối phổ ba tứ cực 6410A có 4 nguồn ion gồm ESI, APCI, APPI và MMI
Hình 2.1. Cấu tạo đầu dò khối phổ Triple Quad Agilent
+ Hệ quang học ion (ion optics) là một bát cực (octopole) gồm tám thanh hình trục xếp song song có tác dụng như bộ lọc khối để đưa ion vào tứ cực thứ nhất Q1, ngoài ra còn còn có 2 thấu kính nằm trước và sau buồng va đập để hỗ trợ đưa ion vào buồng va đập và tứ cực thứ 3.
+ Bộ phân tích khối (mass analyzer) gồm một buồng va chạm (collision cell, được xem là tứ cực thứ hai Q2) đặt ở giữa 2 tứ cực (Q1 và Q3).
+ Đầu dò phát hiện ion (Dual Dynode Detector) gồm có 2 dynode đặt vuông góc với dòng các ion và phân tử trung tính đi ra khỏi bộ phân tích khối.
2.3.1.2. Dụng cụ:
Sử dụng các dụng cụ của phòng thử nghiệm thông thường cụ thể như sau:
- Cân phân tích có độ chính xác 0,01 mg
- Hệ thống lọc dung môi với màng lọc có kích thước lỗ 0,45μm - Máy ly tâm
- Hệ chiết pha rắn Supelco
- Bơm chân không có hệ chiết pha rắn - Bể siêu âm
- Máy lắc (Vortex)
- Hệ thống cô quay chân không - Ống ly tâm, dung tích 50ml - Máy đo pH
- Hệ thống thổi khô bằng khí N2
- Giấy lọc
- Bình định mức các loại: 1ml, 5 ml, 10 ml, 25 ml, 50 ml
- Ống hút (pipette) thủy tinh các loại: 1ml, 2 ml, 5 ml,10 ml, 25 ml
- Các dụng cụ thủy tinh thông thường: Cốc thủy tinh có mỏ (becher), bình nón (erlen), ống nghiệm nhỏ, lọ (vial) 1ml.
2.3.1.3. Hóa chất và dung dịch thử
* Hóa chất
Trong suốt quá trình phân tích, chỉ sử dụng thuốc thử được công nhận đạt chất lượng tinh khiết phân tích hoặc loại dùng cho phân tích sắc ký lỏng.
- Dung dịch natri bicacbonat nước, 3 %
Cho 30 g natri bicacbonat vào 1000 ml nước đã khử ion.
- Dinatri hydro phosphat khan, loại tinh khiết phân tích dùng cho sắc ký lỏng - Kali dihydro phosphat, loại tinh khiết phân tích dùng cho sắc ký lỏng -Dung dịch PBS, pH 7.0:
Cho 0.20 g kali dihydro phosphat, 1,2 g dinatri hydro phosphat khan, 8,00 g NaCI và 0,20 g KCl vào 1000 ml nước đã khử ion và đồng hóa. (chỉnh pH=7.0 bằng HCl).
-Metanol, loại tinh khiết phân tích dùng cho sắc ký lỏng -Acetonitril, loại tinh khiết phân tích dùng cho sắc ký lỏng.
-Nitơ, có độ tinh khiết 99,9 % -Nước cất 2 lần
* Chất chuẩn
- Dung dịch chuẩn từ hãng (hãng sản xuất Romer Lab): Ochratoxin A in Acetonitrile là 10 µg/ml.
- Dung dịch chuẩn gốc 1000 µg/l: Lấy chính xác 100µl chất chuẩn có nồng độ 10000 µg/l vào một vial màu nâu nắp kín, thổi khô, hoà tan cặn trong 1 ml MeOH. Chuẩn gốc được bảo quản ở nhiệt độ từ 2-8°C, trong 6 tháng.
- Dung dịch chuẩn trung gian 500 µg/l: Lấy chính xác 500µl chất chuẩn có nồng độ 1000 µg/l vào một vial màu nâu nắp kín, thổi khô, hoà tan cặn trong 1 ml MeOH.
- Dung dịch chuẩn hỗn hợp làm việc: Được pha tùy vào mục đích xây dựng khoảng đường chuẩn, thông thường nồng độ chuẩn được pha trong khoảng nồng độ từ 2,5 µg/l - 50 µg/l.
Bảng 2.1. Bảng pha dung dịch chuẩn chạy máy
Nồng độ chuẩn làm việc (µg/l) 500 50 50 50 25 Thể tích lấy chuẩn làm việc (µl) 100 500 200 100 100 Định mức (ml) 1 1 1 1 1 Nồng độ chuẩn (µg/l) 50 25 10 5 2,5