CHƯƠNG 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.3.Thí nghiệm lây bệnh nhân tạo
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.3.Thí nghiệm lây bệnh nhân tạo
Thử nghiệm về khả năng lây bệnh nhân tạo được tiến hành để xác nhận lại nguyên nhân gây bệnh. Bệnh có thể được tái tạo bằng cách cấy tác nhân gây bệnh lên bề mặt cây trồng theo cơ chế xâm nhiễm của tác nhân đó, hoặc bằng cách đưa mầm bệnh trực tiếp vào cây [24]. Luận văn đã sử dụng giống lúa BC15 để thực hiện thí nghiệm lây bệnh nhân tạo.
Mô hình thí nghiệm
+ Ngâm ủ lúa 48 giờ ở nhiệt độ 30-32oC. Sau khi hạt ra mầm đều thì đem gieo vào các chậu đã chuẩn bị trước có đường kính 20cm chiều cao 15cm.
+ Giống lúa được gieo vào 15 chậu khác nhau, đến khi cây lúa có chiều cao từ 10-15cm thì thực hiện tái nhiễm.
Chuẩn bị dịch bào tử
+ Dịch bào tử được thu nhận từ nấm đã nuôi cấy 14 ngày tuổi.
+ Cho 10 ml nước cất đã hấp khử trùng vào đĩa PDA chứa mẫu nấm cần lây bệnh.
+ Bào tử hòa cùng với nước được thu lại trong ống nghiệm vô trùng. + Điểu chỉnh mật độ bào tử 106 /ml bằng buồng đếm hồng cầu.
Lây bệnh lên lá
Do nấm được phân lập từ mẫu lá lúa bị bệnh cho nên tái nhiễm lên lá lúa. + Phun 100 µl dịch bào tử lên lá cây được lây bệnh.
+ Phun nước vô trùng lên lá cây dùng làm đối chứng. + Đặt chậu trong tủ ẩm, tránh ánh nắng trực tiếp.
+ Kiểm tra và so sánh những cây được lây bệnh với những cây đối chứng. Quan sát và ghi nhận các triệu chứng và so sánh những triệu chứng này với các triệu chứng đã quan sát được trên đồng ruộng.
+ Sau khi lây bệnh lên lá, ủ cây ở nhiệt độ 25oC – 28oC, độ ẩm đạt 80% trở lên trong vòng 72 giờ dưới bóng tối để bào tử xâm nhập vào cây.
+ Các cây phun nước cất vô trùng được dùng làm đối chứng. + Phân lập lại nấm sau khi tái nhiễm
Việc phân lập lại được thực hiện từ cây đã được phun dịch bào tử nấm để lây bệnh. Nấm được phân lập trên môi trường PDA đến khi thuần.