Chuẩn bị hỗn hợp gồm: 1 kg men bánh mì, 3 kg Na2S2O7, 10 lít DMSO, đun nóng hỗn hợp phản ứng ở 800C trong 2 giờ, khuấy liên tục.
Sau đó để nguội, trung hòa hỗn hợp bằng CaCO3, lượng CaCO3 dư nằm dưới dạng kết tủa, CaCO3 tham gia phản ứng tạo thành CaSO4 cũng dạng kết tủa, và tạo thành CO2 bay đi.
Lọc bỏ chất rắn gồm β-glucan chưa phản ứng, CaCO3, CaSO4,... thu dung dịch để thực hiện bước tiếp theo.
Thêm 10 lít ethanol 80%, thu kết tủa, rửa bằng ethanol khoảng 3 lần, kết tủa chủ yếu gồm sulfate β-glucan, Na2SO4, β-glucan chưa phản ứng và một ít chất khác, hòa tan lại kết tủa trong 20 lít nước. Lọc bỏ bã rắn, dung dịch cho chạy qua lọc rây phân tử 100-150 kDa đến thể tích còn khoảng 10 lít. Thêm 20 lít ethanol 80%, sulfate β-glucan tách ra ở dạng kết tủa, lọc, rửa kết tủa 3 lần bằng ethanol 96%, sấy khô qua đêm ở 600C thu được khoảng trên 148,5 gam.
1kg men bánh mì khô +3kg Na2S2O7 +10lít DMSO
800C, 2 giờ Sulfate β-glucan, Na2SO4, Na2S2O7, DMSO, các chất đã được sulfate hóa
khác …. 1,35 kg CaCO3
10 lít cồn 80% (v/v/) Ly tâm loại bỏ dịch
chứa cồn và DMSO Thêm 20 lít nước, lọc bỏ cặn, thu dịch trong Sulfate β-glucan, Na2SO4, các
chất đã được sulfate hóa khác,... Lọc rây phân tử 100-150 kDa, đến còn 10 lít
Thêm 20 lít ethanol 80%, ly tâm, tách lấy kết tủa, rửa lại bằng cồn 96%, sấy khô ở 60oC 148,5g Sulfate β-glucan 5g men bánh mì khô + 100g [BMIM]Cl 800C, 15 phút Dung dịch men bánh mì trong [BMIM]Cl Thêm 200 mL nước, khuấy trong 10 phút, ly tâm loại bỏ dịch, tiếp tục lập lại 3 lần nữa, lần sau cùng rửa bằng ethanol 96% (v/v), sấy khô ở 60oC 0,7g β-glucan
Hình 2.2. Qui trình điều chế sulfate β-glucan và β-glucan từ men bánh mì Cân