a. Dựa vào phổ IR
Theo công bố trên tạp chí Agricultural and Food Chemistry năm 2006, trong đó có phổ của sulfate β-glucan được điều chế từ yến mạch [50]. Phổ IR của sản phẩm sulfate hóa từ glucan tín hiệu dao động tại 1248 cm-1 và 810 cm- 1 chứng tỏ glucan đã được sulfate hóa. Đây cũng là công bố của tác giả Gabrielle C. Calegari, trên tạp chí Pharmacy and Pharmacology số 5 năm 2017 [77].
Hình 2.4. Phổ FT-IR của sulfate β-glucan [77].
Một công bố khác, 1111 và 804 cm-1, cũng là tín hiệu chứng tỏ có sulfate glucan đó là của tác giả M. Wang và các cộng sự được đăng trên tạp chí Biological Macromolecules 70 năm 2014 [78].
Hình 2.5. Phổ FT-IR của sulfate β-glucan [78]. b. Dựa vào phổ NMR
Tác giả Zhongwei Sun và các cộng sự trên công bố trên tạp chí Carbohydrate Polymers 77 năm 2009 [79], khẳng định phổ CNMR của sulfate β-glucan so với β-glucan sẽ xuất hiện thêm các peak mới về phía trường thấp (downfield) C4 (69,5 ppm) dịch chuyển đến C4-S (75,7 ppm), C2 (73,6 ppm dịch chuyển đến 79,8 ppm), do đã xảy ra sulfate hóa thế nhóm SO4 vào vị trí nhóm OH.
Hình 2.6. Phổ CNMR sản phẩm sulfate hóa S-RVS3-II, glucan RVS3-II [79] Đây là căn cứ có thể dựa vào để khẳng định β-glucan đã được sulfate
tương tác C-H thể hiện trên phổ HSQC, carbon không có liên kết với hydro nào, trong cấu trúc sulfate β-glucan không có dạng carbon này, hoặc đó chỉ là tín hiệu nhiễu.
Do đó, cần thiết phải kiểm tra trên phổ HSQC, nếu trên phổ HSQC của sản phẩm có thể hiện sự thay đổi do chuyển dịch về phía trường thấp tương ứng về cả CNMR và HNMR thì β-glucan đã được sulfate hóa. Trong đó, tại vị trí carbon nào có tín hiệu dịch chuyển về phía trường thấp thì tại vị trí đó, nhóm hydroxyl đã được thay thế bằng nhóm sulfate.