glucan.
Để xác định hàm lượng β-glucan trong các sản phẩm luận văn, tôi tiến hành chuẩn độ 5 mL dung dịch K3Fe(CN)6 1% đến điểm tương đương, tiêu tốn hết V0, V1, V2, V3 mL dung dịch β-glucan chuẩn, men bánh mì và sulfate β- glucan, các số liệu thu thập được ghi trong bảng 3.1.
Bảng 3.1. Hàm lượng β-glucan các mẫu kiểm STT Mẫu thử Thể tích (mL) dịch đường khử tiêu tốn
cho chuẩn độ 5 mL K3Fe(CN)6 1%
Hàm lượng β-glucan 1 β-glucan chuẩn 14,80 14,60 14,60 Trung bình V0 = 14,67 ± 0,12 98,00% 2 β-glucan từ men bánh mì 25,20 25,40 25,40 Trung bình V1 = 25,33 ± 0,12 14,19% 3 β-glucan luận văn 15,00 14,80 14,80 Trung bình V2 = 14,87 ± 0,12 96,68%
4 Sulfate β-
glucan 17,60
17,80 17,60
Trung bình V3 = 17,69 ± 0,12 81,27%
Hàm lượng β-glucan có trong men bánh mì (tách chiết):
Gm = 0,98 × (V0/4V1) × 100% = 98 × (14,67/4×25,33) × 100% = 14,19%. Hàm lượng β-glucan có trong β-glucan luận văn:
GGL = 0,98 × (V0/V2) × 100% = 98 × (14,67/14,87) × 100%= 96,68%. Hàm lượng β-glucan có trong mẫu sulfate β-glucan:
GSG = 0,98 × (V0/V3) × 100% = 98 × (14,67/17,69) × 100%= 81,27% Để kiểm chứng lại sản phẩm có phải là β-glucan, tôi tiến hành so sánh phổ hồng ngoại của sản phẩm và chất chuẩn.
Hình 3.2. Phổ hồng ngoại của β-glucan tách chiết (B)
Đặc trưng cấu trúc sản phẩm β-glucan tách chiết được khảo sát bằng phổ hồng ngoại và so sánh với phổ hồng ngoại của β-glucan chuẩn. Kết quả từ hình 3.2 và 3.3 cho thấy các đỉnh chính xuất hiện từ 400-4000 cm-1 và được liệt kê ở bảng 3.2 cho thấy đỉnh xuất hiện ở 3437 cm-1 thuộc liên kết O-H xuất có cường độ cao và vai rộng, đỉnh 2922 cm-1 có cường độ trung bình và vai hẹp cùng với đỉnh có cường độ yếu ở khoảng 2088 cm-1 điều thuộc liên kết C-H. Các đỉnh tại số sóng 1641 và 1072 cm-1 là đặc trưng của liên kết CO. Trong khi đó các đặc trưng của liên kết CCH, C-O-C và CC được biểu hiện ở các đỉnh tương ứng là 1240, 1152 và 880 cm-1.
Phổ hồng ngoại của β-glucan chuẩn (A) và của β-glucan tách chiết (B) trên hình 3.2 và hình 3.3 cho thấy sau khi được tách chiết qua chất lỏng ion, protein trong men đã giảm đi rất mạnh (vùng tín hiệu tại 1662 và 1544) chứng tỏ đã loại bỏ được hầu hết protein, còn lại β-(1→3)-glucan với hấp thụ tại 1072 cm-1 và 880 cm-1, qua định lượng và định tính trên phổ IR chứng tỏ sản phẩm là β-(1→3)-glucan 96,68%.
Bảng 3.2. Các đỉnh của các nhóm chức đặc trưng cơ bản của β-glucan TT Đỉnh (cm-1) Nhóm chức TT Đỉnh (cm-1) Nhóm chức 1 3437 OH 5 1152 COC 2 2922 CH2 6 1072 CO 3 1641 CO 7 1035 CC 4 1240 CCH 8 880 CO của β-glucan
Mặt khác trong phổ NMR của sản phẩm β-glucan từ sản phẩm:
Các tín hiệu cộng hưởng trên phổ HSQC của β-glucan thu được từ phương pháp tách chiết bằng chất lỏng ion [BMIM]Cl, với các độ dịch chuyển hóa học của C1, C3, C5, C2, C4, C6 tương ứng với độ dịch chuyển 102,79 ppm; 86,09 ppm; 76,19 ppm; 72,59 ppm; 68,22 ppm; 60,70 ppm và H1, H6a, H3, H6b, H2, H5, H4 là 4,537 ppm; 3,729 ppm; 3,487 ppm; 3,473 ppm; 3,326 ppm; 3,311 ppm; 3,273 ppm. Hoàn toàn tương đồng với tín hiệu cộng hưởng phổ HSQC của β-(1→3)-glucan từ công bố trên (hình 2.3).
Các tín hiệu cộng hưởng tương ứng từ phổ HNMR và CNMR của mỗi tín hiệu tương tác C-H trên HSQC của β-glucan từ luận văn (hình 3.4) đều tương ứng từng cặp với phổ đã được công bố, chứng tỏ sản phẩm thu từ phương pháp tách chiết là β-glucan.
Ngoài các tín hiệu cộng hưởng này, trên phổ không có peak khác, chứng tỏ đây là β-glucan đạt độ tinh sạch rất cao, phù hợp với phân tích định lượng β- glucan đạt 96,68% (bảng 3.1).
C6-H6a C6-H6b
C3-H3 C4-H4
C2-H2
C5-H5
Hình 3.3. Phổ HSQC của β-glucan tách chiết. Bảng 3.3. Số liệu NMR của β-glucan tách chiết
Vị trí β-glucan tách chiết (DMSO-d6) Hợp chất so sánh β-glucan [76] (DMSO-d6) Loại cacbon δH (ppm) δC (ppm) δC (ppm) 1 -CH- 4,537 102,79 102,60 2 -CH- 3,326 72,59 72,78
3 -CH- 3,487 86,09 86,32
4 -CH- 3,273 68,22 68,12
5 -CH- 3,311 76,19 76,34
6 -CH2- 3,729 ; 3,473 60,70 60,52