Phương pháp xác định IgA, IgG và IgM tại mô

Một phần của tài liệu Nghiên cứu nồng độ IgA, IgG, IgM huyết tương ở bệnh nhân hội chứng thận hư nguyên phát (FULL TEXT) (Trang 53 - 54)

Khác với các mô khác, việc xác định có mặt IgA, IgG và IgM cùng bổ thể C3, C1q, các chuỗi kappa và lamda trên mô thận (mảng sinh thiết) có ý nghĩa trong chẩn đoán tổn thương mô bệnh và loại bệnh thận [76]:

- Phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang: Miễn dịch huỳnh quang

(ImmunoFluorescense) là phương pháp nhuộm hóa mô giúp phát hiện ra kháng thể ở trong mô hay trong dịch cơ thể. Nguyên lý chung: Dựa trên phản ứng kháng nguyên kết hợp với kháng thể đặc hiệu. Kháng thể sẽ được gắn với chất màu - Fluorochrome. Sau đó tạo thành phức hợp Kháng nguyên - Kháng thể - Chất màu sẽ phát ra ánh sáng màu (tùy thuộc vào chất màu được gắn) khi được chiếu tia tử ngoại. Màu xanh táo với FITC (Flourescine isothiocyanate), màu đỏ với TRITC (Tetramethylrhodamin isothiocyanate). Nhuộm miễn dịch huỳnh quang phát hiện được sự có mặt của IgA, IgG và IgM trong các vị trí của cầu thận, là phương pháp được sử dụng phổ biến trên thế giới, có giá trị chẩn đoán, và chẩn đoán chính xác cao.

- Nhuộm hóa mô miễn dịch: Hoá mô miễn dịch (immunohistochemistry) là phương pháp được áp dụng phổ biến để xác định các dấu ấn ung thư trên mô. Phương pháp này sử dụng kết hợp hóa chất với phản ứng miễn dịch. Qua đó quan sát sự tồn tại của kháng nguyên (bản chất protein) trong một mô bệnh phẩm. Thông thường, các kháng nguyên này không được thể hiện dưới dạng

một hình thái sinh học có thể quan sát. Hóa mô miễn dịch là phương pháp xác định những kháng nguyên đặc hiệu có trong mô hoặc tế bào, dựa trên sự kết hợp kháng nguyên - kháng thể. Cách làm hóa mô miễn dịch là từ mẫu mô đã được đúc trong khối nến của phương pháp giải phẫu bệnh thường quy, được cắt mỏng và nhuộm theo quy trình như sau: Bộc lộ kháng nguyên - ủ với kháng thể thứ 1 - ủ với kháng thể thứ 2 - nhuộm với chất chỉ thị màu (DAB hoặc AEC) - nhuộm Hematoxylin và đọc trên kính hiển vi thông thường. Với mô thận, nếu không có miễn dịch huỳnh quang có thể sử dụng phương pháp này để xác định sự có mặt của IgA, IgG và IgM tại cầu thận. Tuy nhiên, vì đọc kết quả trên kính hiển vi quang học, nên khó phát hiện trường hợp bệnh nhân có các Ig này với số lượng ít trên thận.

- Phương pháp lai tại chỗ: Lai tại chỗ (In situ hybridization- ISH) là phương

pháp lai sử dụng một đoạn ADN, ARN bổ sung hoặc một đoạn axit nucleic đã biến đổi để xác định vị trí của một trình tự ADN hay ARN nhất định trên một phần mẫu mô (tại chỗ). Lai tại chỗ khác với nhuộm miễn dịch huỳnh quang, phương pháp nhuộm hoá mô miễn dịch thường dùng để xác định vị trí của protein trên mẫu mô. Lai tại chỗ là một kỹ thuật hiệu quả để xác định các loại mARN nhất định trong từng tế bào của các mẫu mô. Tuy nhiên, phương pháp này đòi hỏi nhiều bước, cần tối ưu hóa cho từng loại mô và cho mỗi loại mồi sử dụng. Để có thể giữ mARN đích trong các mô, người ta thường sử dụng các chất cố định liên kết chéo (ví dụ như formaldehyde). Ở mô thận, ít dung phương pháp này, bởi phương pháp miễn dịch huỳnh quang cho kết quả rất chính xác, ngay cả khi có một lượng nhỏ IgA, IgG và IgM.

Một phần của tài liệu Nghiên cứu nồng độ IgA, IgG, IgM huyết tương ở bệnh nhân hội chứng thận hư nguyên phát (FULL TEXT) (Trang 53 - 54)