Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của các chủng vi khuẩn nội sinh chọn

Một phần của tài liệu NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN NỘI SINH CHỌN LỌC ĐẾN SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN CÂY CÀ PHÊ VỐI (Trang 67 - 72)

chọn lọc đến sinh trưởng của cà phê vối giai đoạn kiến thiết cơ bản trên đồng ruộng Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của các chủng vi khuẩn nội sinh chọn lọc đến sinh trưởng của cà phê vối giai đoạn kiến thiết cơ bản trên đồng ruộng.

a. Thời gian: từ tháng 9/2017 đến tháng 3/2019.

b. Địa điểm: xã Hịa Thuận, thành phố Buơn Ma Thuột, tỉnh Đắk Lắk. c. Đối tượng nghiên cứu:

- Ba chủng vi khuẩn cĩ ảnh hưởng tốt nhất đến sinh trưởng của cây cà phê vối giai đoạn vườn ươm được chọn lọc từ kết quả nghiên cứu của thí nghiệm 1 gồm: B.

cereus M15, B. subtilis EK17 và B. pumilus BMT4.

- Cây cà phê vối thực sinh, trồng cuối tháng 7 năm 2017, cĩ 5 – 6 cặp lá thật, tái canh trên nền đất đỏ bazan. Saụ vụ thu hoạch năm 2016, vườn cây cà phê già cỗi bị nhổ bỏ bằng máy múc, thu gom và đưa tồn bộ thân, cành, rễ ra khỏi vườn. Đất sau đĩ được phơi trong 4 tháng, rồi rải vơi bột (1 tấn/ha). Phân hữu cơ ủ từ vỏ cà phê + phân bị + Trichoderma được bĩn với lượng 15 kg/hố khoảng 1 tháng trước khi trồng lại. Phân lân nung chảy Văn Điển được bĩn lĩt vào hố trước khi trồng với lượng 500g/hố.

d. Phương pháp bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí theo kiểu khối đầy đủ ngẫu nhiên 2 yếu tố với 4 tổ hợp các chủng vi khuẩn và 3 mức liều lượng. Thí nghiệm được lặp lại 3 lần. Tổng thí nghiệm gồm 36 ơ cơ sở. Mỗi ơ cơ sở gồm 9 cây. Giữa các ơ cơ sở được cách ly bởi 1 hàng cà phê. Các cơng thức thí nghiệm như sau:

Bảng 2.1. Cơng thức thí nghiệm vườn kiến thiết cơ bản ngồi đồng ruộng

Hỗn hợp vi B0 B1 B2 B3

khuẩn (Đối chứng) (B. cereus + (B. subtilis + (B. cereus + Liều lượng B. subtilis) B. pumilus) B. pumilus)

D1 (10ml/cây) D1B0 (CT1) D1B1 (CT4) D1B2 (CT7) D1B3 (CT10) D2 (20ml/cây) D2B0 (CT2) D2B1 (CT5) D2B2 (CT8) D2B3 (CT11) D3 (30ml/cây) D3B0 (CT3) D3B1 (CT6) D3B2 (CT9) D3B3 (CT12)

Ghi chú:D: các mức liều lượng hỗn hợp vi khuẩn; B: hỗn hợp các chủng vi khuẩn.

Các cơng thức thí nghiệm được bố trí như sau:

Sơ đồ 2.1. Sơ đồ bố trí thí nghiệm vườn kiến thiết cơ bản

LLL Cơng thức thí nghiệm

I CT1 CT4 CT7 CT10 CT3 CT5 CT9 CT12 CT2 CT6 CT8 CT11

II CT5 CT2 CT11 CT8 CT6 CT12 CT1 CT7 CT10 CT9 CT4 CT3

III CT7 CT12 CT4 CT2 CT9 CT3 CT10 CT6 CT8 CT1 CT11 CT5

Các cây cà phê trong thí nghiệm được chăm sĩc dựa theo Quy trình tái canh cây cà phê vối (Bộ Nơng nghiệp và Phát triển nơng thơn, 2016) [4] với chế độ phân bĩn hĩa học như sau:

- Các cơng thức đối chứng B0 (CT1, CT2 và CT3): bĩn phân hĩa học theo quy trình tái canh cây cà phê vối.

- Các cơng thức xử lý hỗn hợp vi khuẩn nội sinh (CT4 đến CT12)

+ Năm thứ nhất: giảm 25% phân N so với quy trình (111 kg urê + 550 kg lân nung chảy + 70 kg kali clorua).

+ Năm thứ hai: giảm 25% phân N và 25% P so với quy trình (150 kg ure + 75 kg SA + 412,5 kg lân nung chảy + 150 kg kali clorua).

e. Phương pháp xử lý: Hỗn hợp huyền phù vi khuẩn (109 CFU/mL) được xử lý 6 lần như sau: lần 1: tháng 9/2017, lần 2: tháng 11/2017, lần 3: tháng 3/2018, lần 4: tháng 5/2018, lần 5: tháng 9/2018, lần 6: tháng 11/2018. Hỗn hợp huyền phù vi

khuẩn được pha trong 2 - 5 lít nước/cây tùy vào tháng tuổi của cây. Tưới vào đất ở vị trí gốc và xung quanh tán cây cà phê. Trước khi xử lý, cây cà phê được tưới nước đủ ẩm. Vật liệu che phủ gốc được cào ra trước khi xử lý huyền phù vi khuẩn và lấp lại xong khi xử lý xong. Phân bĩn hĩa học được chia thành 4 lần bĩn theo Quy trình tái canh cây cà phê vối.

f. Các chỉ tiêu theo dõi:

- Hàm lượng N và P trong lá (%)

- Hàm lượng diệp lục tố (Chla, Chlb và Ccar trong lá (mg/g lá tươi) - Chiều cao cây (cm)

- Đường kính gốc (mm)

- Số cặp cành cơ bản (cặp cành/cây) - Số cặp lá (cặp lá/cây)

- Chiều dài cành cơ bản (cm/cành) - Số đốt/cành cơ bản (đốt/cành) - Số quả trên chùm (quả/chùm)

- Thành phần và mật độ tuyến trùng trong đất (con/50g đất)

Thời gian theo dõi: Định kì theo dõi 2 tháng/lần (trước khi bĩn phân và xử lý thuốc hố học, nếu cĩ).

2.4.3. Phương pháp nghiên cứu ảnh hưởng của các chủng vi khuẩn nội sinh chọn lọc đến sinh trưởng của cà phê vối giai đoạn kinh doanh ngồi đồng ruộng

Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng của các chủng vi khuẩn nội sinh chọn lọc đến sinh trưởng, phát triển của cà phê vối giai đoạn kinh doanh trên đồng ruộng

a.Thời gian: Tháng 7/2016 – Tháng 11/2018

b. Địa điểm: xã Hịa Xuân, thành phố Buơn Ma Thuột, tỉnh Đắk Lắk. c. Đối tượng nghiên cứu:

- Cây cà phê vối giai đoạn kinh doanh 19 tuổi trồng trên nền đất đỏ bazan. Sầu riêng được trồng xen trong vườn cà phê với khoảng cách 12 x 12 m. Phân hữu cơ hoai mục ủ từ vỏ cà phê + phân bị + Trichoderma được bĩn 2 năm/lần với lượng 15

kg/cây/đợt. Năng suất trung bình của vườn cây trước khi tiến hành thí nghiệm dao động trong khoảng 2,7 – 3,0 tấn nhân/ha.

- Ba chủng vi khuẩn cĩ ảnh hưởng tốt nhất đến sinh trưởng của cây cà phê vối giai đoạn vườn ươm được chọn lọc từ kết quả nghiên cứu của thí nghiệm 1 gồm: B.

cereus M15, B. subtilis EK17 và B. pumilus BMT4.

d. Phương pháp bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí theo kiểu khối đầy đủ ngẫu nhiên 2 yếu tố với 4 tổ hợp các chủng vi khuẩn và 3 mức liều lượng. Thí nghiệm được lặp lại 3 lần. Tổng thí nghiệm gồm 36 ơ cơ sở. Mỗi ơ cơ sở gồm 9 cây. Giữa các ơ cơ sở được cách ly bởi 1 hàng cà phê. Các cơng thức thí nghiệm như sau:

Bảng 2.2. Cơng thức thí nghiệm vườn kinh doanh ngồi đồng ruộng

Hỗn hợp vi B0 B1 B2 B3

khuẩn (Đối chứng) (B. cereus M15 + (B. subtilis EK17+ (B. cereus M15 +

Liều lượng B. subtilis EK17) B. pumilus BMT4) B. pumilus BMT4)

D1 (20ml/cây) D1B0 (CT1) D1B1 (CT4) D1B2 (CT7) D1B3 (CT10) D2 (30ml/cây) D2B0 (CT2) D2B1 (CT5) D2B2 (CT8) D2B3 (CT11) D3 (40ml/cây) D3B0 (CT3) D3B1 (CT6) D3B2 (CT9) D3B3 (CT12)

Ghi chú: D: các mức liều lượng hỗn hợp vi khuẩn; B: hỗn hợp các chủng vi khuẩn.

Các cơng thức thí nghiệm được bố trí theo khối ngẫu nhiên đầy đủ (RCBD) như sau:

Các cây cà phê trong thí nghiệm được chăm sĩc dựa theo Quy trình tái canh cây cà phê vối (Bộ Nơng nghiệp và Phát triển nơng thơn, 2016) [4], với chế độ phân bĩn hĩa học như sau:

- Các cơng thức đối chứng B0 (CT1, CT2 và CT3): 100% phân bĩn theo quy trình (400 kg ure + 250 kg SA + 550 kg lân nung chảy + 350 kg Kali clorua)

- Các cơng thức xử lý hỗn hợp vi khuẩn nội sinh (CT4 đến CT12): giảm 25% lượng phân N và P theo quy trình (300 kg ure + 188 kg SA + 412 kg lân nung chảy + 350 kg kali clorua).

Sơ đồ 2.2. Sơ đồ bố trí thí nghiệm vườn kinh doanh LLL CƠNG THỨC THÍ NGHIỆM I CT8 CT11 CT1 CT5 CT12 CT4 CT2 CT7 CT9 CT10 CT3 CT6 II CT4 CT9 CT5 CT2 CT8 CT11 CT6 CT1 CT12 CT7 CT10 CT3 III CT1 CT6 CT7 CT12 CT4 CT2 CT9 CT3 CT8 CT5 CT11 CT10 e. Phương pháp xử lý:

- Hỗn hợp huyền phù vi khuẩn nghiên cứu (109 CFU/mL) được xử lý 5 lần/năm (giữa mùa khơ; cuối mùa khơ; đầu mùa mưa; giữa mùa mưa; cuối mùa mưa). Lần xử lý đầu tiên bắt đầu từ tháng 7/2016. Hỗn hợp huyền phù vi khuẩn được khuấy đều trong nước sạch và tưới 5 lít nước/cây. Tưới vào đất ở vị trí gốc và xung quanh tán cây cà phê. Trước khi xử lý, cây cà phê được tưới nước đủ ẩm. Vật liệu che phủ gốc được cào ra trước khi xử lý huyền phù vi khuẩn và lấp lại xong khi xử lý xong.

- Phân bĩn được bĩn theo qui trình tái canh cà phê của (Bộ Nơng nghiệp và Phát triển nơng thơn, 2016) [4]

f. Các chỉ tiêu theo dõi:

- Hàm lượng N và P trong lá (% chất khơ trong lá)

- Hàm lượng diệp lục tố trong lá: Chla, Chlb và Ccar (mg/g lá tươi) - Chiều dài đoạn cành dự trữ (cm)

- Số đốt trên đoạn cành dự trữ (đốt/cành) - Số quả trên chùm (quả/chùm)

- Tỷ lệ quả tươi : nhân

- Năng suất cà phê nhân (tấn/ha) - Tỉ lệ hạt cà phê nhân xuất khẩu (%)

- Mật độ tuyến trùng Pratylenchus sp. và Meloidogyne sp. trong đất (con/50g) và trong rễ (con/5 g rễ).

Thời gian theo dõi: Định kì theo dõi 2 tháng/lần (trước khi bĩn phân và xử lý thuốc hố học, nếu cĩ).

Một phần của tài liệu NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN NỘI SINH CHỌN LỌC ĐẾN SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN CÂY CÀ PHÊ VỐI (Trang 67 - 72)