B. Cụm chồi từ phụi hạt chớn trờn mụi trường bổ sung 13 mg/l BAP C. Cụm chồi hoàn chỉnh sau khi kộo dài chồi.
Như vậy, việc bổ sung BAP làm giảm khả năng phỏt sinh mụ sẹo, kớch thớch việc hỡnh thành chồi bất ủịnh trong nuụi cấy in vitro cõy thụng nhựa. Mặc dự vậy, khi cỏc mẫu cấy ủược chuyển từ mụi trường cảm ứng tạo ủa chồi sang mụi trường tạo ủa chồi, lượng mẫu chết tăng dần theo nồng ủộ BAP, ủú là do tỏc ủộng ủột ngột của mụi trường nuụi cấy ở nồng ủộ chất ủiều tiết sinh trưởng cao tới mẫu vật. Cũng trong nghiờn cứu này chỳng tụi quan sỏt thấy, cỏc mẫu cú thời gian cảm ứng chờnh lệch lớn cú mức ủộ mụ sẹo húa khỏc nhau và ủõy là yếu tố chỳng tụi cần quan tõm ủể nõng cao hiệu quả tạo ủa chồi.
Căn cứ vào hiệu quả tạo ủa chồi của cỏc cụng thức khỏc nhau, chỳng tụi lựa chọn mụi trường tỏi sinh ủa chồi cú bổ sung 9 mg/l BAP làm cơ sở cho cỏc thớ nghiệm tỏi sinh ủa chồi từ phụi hạt chớn ở cỏc bước tiếp theo.
4.1.3 Ảnh hưởng của thời gian cảm ứng tới khả năng tạo ủa chồi từ phụi hạt chớn
Trong nghiờn cứu của Jean và cộng sự [48]; Lin và cộng sự [54], chỉ ra rằng, kớch thước hay tuổi của mẫu vật cú ảnh hưởng trực tiếp tới khả năng tỏi sinh và chuyển gen vào cõy thụng. Trờn mụi trường cảm ứng, cỏc tế bào phõn chia mạnh, do ủú thời
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………32
gian cảm ứng cú ảnh hưởng trực tiếp tới kớch thước mẫu cấy, thời gian cảm ứng càng dài kớch thước mẫu càng lớn. Tuy nhiờn, mẫu vật duy trỡ lõu trờn mụi trường cảm ứng sẽ gõy nờn hiện tượng mụ sẹo húa mẫu cấy.
Kết quả ở thớ nghiệm trờn ủó cho thấy thời gian cảm ứng cú tỏc ủộng tới khả năng mụ sẹo húa và tỏi sinh chồi. ðể nõng cao hiệu quả tỏi sinh ủa chồi cõy thụng nhựa, trong nghiờn cứu này, yếu tố thớ nghiệm ủược quan tõm là ảnh hưởng của thời gian cảm ứng tới hiệu quả tỏi sinh ủa chồi. Vật liệu sử dụng là phụi hạt chớn, ngưỡng thời gian cảm ứng ủược bố trớ dao ủộng từ 2-8 ngày. Sau cỏc khoảng thời gian cảm ứng khỏc nhau, phụi hạt ủược chuyển sang mụi trường tạo ủa chồi ủược bổ sung 9 mg/l BAP (ủó ủược lựa chọn ở thớ nghiệm trước). Ảnh hưởng của thời gian cảm ứng ủược ủỏnh giỏ thụng qua tỷ lệ tạo ủa chồi, ủơn chồi và tỷ lệ mẫu mụ sẹo húa, số liệu thể hiện trờn bảng 4.3.
Giai ủoạn cảm ứng cú vai trũ quan trọng tới hiệu quả tỏi sinh chồi trực tiếp từ phụi hạt chớn. Thể hiện rất rừ ở cụng thức ủối chứng, phụi sau khi tỏch khụng qua giai ủoạn cảm ứng ủặt trực tiếp lờn mụi trường tạo ủa chồi dẫn tới tỷ lệ mẫu chết cao (40,3%). Trong số cỏc phụi sống sút ở cụng thức ủối chứng một số mẫu vẫn cú khả năng tạo ủa chồi (4,2%) nhưng số lượng chồi chỉ ủạt 2-3 chồi/ cụm dẫn tới số chồi trung bỡnh của cụng thức này chỉ ủạt 1,7 chồi. Do khụng qua giai ủoạn cảm ứng nờn toàn bộ mẫu cấy khụng cú hiện tượng mụ sẹo húa.
Bảng 4.3. Thời gian cảm ứng và hiệu quả tạo ủa chồi từ phụi hạt chớn Thời gian
cảm ứng Tỉ lệ mẫu tạo ủa chồi (%)
Tỷ lệ mụ sẹo húa
(%)
Tỷ lệ mẫu tạo ủơn chồi
(%) Tỷ lệ mẫu Tỷ lệ mẫu chết (%) trung bỡnh Số chồi ðC 4,2 0 55,5 40,3 1,7 2 ngày 8,5 11,2 47,3 33,0 3,6 4 ngày 45,3 26,9 10,5 17,3 11,5 6 ngày 61,5 28,7 0,0 9,8 12,2 8 ngày 22,7 75,8 0,0 1,5 9,4 LSD (0,05) 2,0 CV % 3,7
Trường ðại học Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghiệp ………33
Ở cỏc cụng thức cú qua giai ủoạn cảm ứng, tỷ lệ mẫu chết giảm dần theo chiều tăng của thời gian cảm ứng. Trong giai ủoạn cảm ứng cỏc tế bào phõn chia mạnh, phụi tăng nhanh về kớch thước ủồng thời xuất hiện hiện tượng mụ sẹo húa mẫu cấy. Tỷ lệ mụ sẹo húa mẫu cấy tăng lờn khi thời gian cảm ứng tăng, dao ủộng từ 11,2% (2 ngày) tới 75,8% (8 ngày). Thời gian cảm ứng khụng chỉ ảnh hưởng trực tiếp tới tỷ lệ mẫu chết, mẫu bị mụ sẹo húa mà con ủúng vai trũ quan trọng tới việc hỡnh thành ủa chồi trong cỏc giai ủoạn sau. Cụ thể, lượng mẫu tạo ủơn chồi giảm dần khi tăng thời gian cảm ứng và tỷ lễ mẫu tạo ủa chồi tăng lờn. Tuy nhiờn, khi thời gian cảm ứng quỏ dài (8 ngày), tỷ lệ tạo ủa chồi giảm mạnh do lượng mẫu bị mụ sẹo húa tăng cao. Kết quả nhõn chồi cho thấy, ở ngưỡng thời gian cảm ứng 6 ngày cho số chồi trung bỡnh cao nhất (12,2 chồi/mẫu cấy). Mặc dự mức chờnh lệch về hệ số nhõn chồi khụng cao giữa hai ngưỡng cảm ứng 4 ngày (11,5 chồi) và 6 ngày (12,2 chồi) nhưng ở ngưỡng thời gian cảm ứng 6 ngày khụng cũn tỷ lệ mẫu tạo ủơn chồi. Ngoài ra khi thời gian cảm ứng tiếp tục tăng, mức ủộ mụ sẹo húa cao khụng chỉức chếưu thế ngọn mà cũn ức chế luụn sự phỏt triển của chồi bờn, mẫu cú xu hướng mụ sẹo húa hoàn toàn dẫn tới số chồi trung bỡnh giảm xuống cũn 9,4 chồi /cụm và tỷ lệ tạo ủa chồi giảm xuống chỉ cũn 22,7% (thời gian cảm ứng 8 ngày).
Hỡnh 4.3. Cỏc dạng chồi hỡnh thành ở thời gian cảm ứng khỏc nhau