Enzym peroxydaza
2.6.2.1.Isozym esteraza (EST.E.C.3.1.1.1)
Esteraza thuộc lớp hydrolaza là enzym xúc tác cho phản ứng thuỷ phân các este
có 3 nhóm esteraza:
Arylesteraza (A.esteraza); Aliesteraza (B. esteraza) và Cholinesteraza (C.esteraza). Các A.esteraza thủy phân este thơm nhanh hơn mạch thẳng, trong khi đó các B. esteraza thủy phân những este mạch thẳng nhanh hơn nhóm A.esteraza. C.esterazacos tác dụng mạnh nhất đối với cholineste và cũng có thể thủy phân este mạch thẳng và este thơm nh−ng không dễ dàng bằng hai nhóm kia.
Isozym esteraza đã đ−ợc nghiên cứu bằng ph−ơng pháp điện di và nhuộm cơ chất thành công trên đối t−ợng là ấu trùng muỗi (Tsukamoto, 1989). Kết quả là phát hiện đ−ợc nhiều băng isozym, trong đó có một số băng rất nhạy với sự oxy hóa đặc biệt bị biến tính trong quá trình tách chiết enzym. Quá trình tách chiết enzym từ đối t−ợng thí nghiệm bằng n−ớc cất có bổ sung thêm sacaroza, Tween 80 hoặc TritonX-100, không làm thay đổi hoạt tính của enzym. Mặc dù vậy tách chiết enzym bằng dung dịch chống oxy hóa nh− 2- mercaproethanol hoặc Dithiothretol (DDT) với những nồng độ khác nhau (10-4, 10-3 và 10-2M) là có hiệu quả trong việc bảo vệ hoặc hoạt hóa những isozym này. Có thể sử dụng cả hai loại đệm phosphat sẽ tốt hơn vì sự bắt màu mạnh của: α- naphthy axetat th−ờng đ−ợc sử dụng nh− một cơ chất nhẹ nhất và thể hiện rõ nhất các băng trong khoảng pH 6.8- 8.5 thậm chí ngay cả ở điều kiện lạnh. Sử
dụng β - naphthy axetat là cơ chất ở cùng điều kiện nhằm phát hiện đ−ợc các băng enzym mờ. Để thu đ−ợc các băng isozym có c−ờng độ màu đỏ mạnh thì cần ủ gel trong điều kiện pH cao (8.0 - 8.5) và nhiệt độ cao hơn 380C, trái lại c−ờng độ màu nền cũng tăng lên.
Những cơ chất khác, α-naphthyl butyrat và β-naphthy butyrat cũng đ−ợc thử nghiệm và cho kết quả t−ơng tự α hoặc β-naphthyl axetat.