- Lý lịch: LVN10 là giống lai đơn do GS.TS Trần Hồng Uy, GS.PTS Ngô Hữu Tình, PTS Phan Xuân Hào và cộng tác viên của Viện nghiên cứu
Ph−ơng pháp xác định hoạt độ Enzym Peroxidaza: + Hóa chất:
+ Hóa chất:
Đệm photphat pH 8.0. Toluen hoặc clorofom.
Dung dịch H2O2 1%, H2SO4 đặc.
Dung dịch H2SO4 80%. Dung dịchKMnO4 0.1N.
+ Tiến hành:
- Dịch chiết peroxidaza: lấy2g nguyên liệu nghiền cẩn thận trong cối sứ với 20ml dung dịch đệm photphat pH 8.0, thêm 4-5 giọt toluen. Chuyển hỗn hợp vào bình định mức 100ml, định mức đến vạch bằng dung dịch đệm nghiền. Lọc lấy dịch trong.
- Cho vào bìng nón cỡ 250ml: 10ml dung dịch pyrogalol 1% mới pha, 1ml H2O2 1% ủ ở nhiệt độ 20 - 250C. Cho thêm vào hỗn hợp 40ml dịch chiết enzym( cũng ở nhiệt độ 20 - 250C ), giữ phản ứng trong khoảng 12-20 h tùy thuộc vào hoạt độ enzym khác nhau.
Làm thí nghiệm kiểm tra song song: cho vào bình nón 250ml: 40ml dung dịch enzym(làm mất hoạt tính enzym), đun sôi 10 phút, làm nguội và cho thêm 10ml pyrogalol 1%, 1ml H2O2 1% nh− mẫu thí nghiệm.
Trong thời gian phản ứng, purpurogalin kết tủa màu nâu.Thêm vào bình 1 - 2ml H2SO4 đặc. Lọc kết tủa bằng phễu thủy tinh xốp. Rửa kết tủa bằng n−ớc cất cho đến khi n−ớc rửa không còn khử KMnO4. Sau đó hòa tan kết tủa trực tiếp trên phễu với 10-20ml H2SO4 80%. Rửa phễu lọc bằng n−ớc cất (gấp 7-20 lần l−ợng axit đã sử dụng).
Đun nóng dung dịch đến 50-600C và chuẩn độ bằng dung dịch KMnO4 0.1N đến khi xuất hiện màu hồng nhạt và cuối cùng là màu hồng khi cód− 1 giọt KMnO4.
+ Tính kết quả:
Hoạt độ của peroxidaza đ−ợc hiển thị bằng số ml KMnO4 0.1N t−ơng ứng với 1g mẫu sau 15 phút tác dụng và đ−ợc tính theo công thức sau:
X = (a-b) : w Trong đó:
a - số ml dung dịch KMnO4 0.1N dùng để chuẩn độ mẫu thí nghiệm, b - số ml dung dịch KMnO4 0.1N dùng để chuẩn độ bình kiểm tra,