Kỹ thuật gây động dục đồng pha được áp dụng khá lâu, ngày càng được bồ sung. điều chỉnh, hoàn thiện cho hợp lý và chính xác hơn. Phương pháp này được thực hiện chủ yếu dựa vào sự điều khiển hoạt động sinh lý sinh dục cái bằng cơ chế tác động ngược giữa buồng trứng và đám rối đồi thị, tuyến yên nhằm kiểm soát hoạt động của thể vàng và cơ chế sinh trưởng của các noãn bao. Progesteron là một trong các hon non chủ yếu điều hòa chu kỳ động dục của con cái bằng phản ứng ngược âm tính ở trục đồi thị - tuyến yên dẫn đến làm giảm hormon sinh dục và giảm sinh trưởng cửa noãn bao.
Sự sụt giảm hàm lượng progesteron ở cuối chu kỳ động dục kéo theo sự tăng lên liên tục của hàm lượng oestrogen, FSH và LH. Sự tăng lên của các hom lon này gây ra sự tăng sinh của noãn bao, buồng trứng và rụng trứng.
Để điều khiển chu kỳ động dục, người ta dựa chủ yếu vào 2 nguyên tắc sau: a/ Thiết lập một pha thể vàng nhân tạo bằng cách tiêm progesteron hoặc progestagen vào cơ thể con cái
của nó.
Progestagen ức chế chức năng của trục Tuyến yên - Buồng trứng và tác động vào đám rối đồi thị làm ngừng quá trình sản sinh ra FRF và LRF
Prostagladin có tác dụng làm ngừng hoạt động bình thường của thể vàng bằng cách phân huỷ progesteron hoặc progestagen tổng hợp ở trong máu, chính điều này làm xuất hiện trở lại chu kỳ động dục hoặc rụng trứng
Ngoài ra, để tiếp cận gần hơn các điều kiện sinh lý bình thường, làm tăng mức độ đồng pha, làm giảm động dục ẩn, các xử lý gây động dục bằng progesteron hoặc progestagen cần được kết hợp với việc sử dụng các hormon sinh dục khác, như oestrogen, gonadotropin, GnRH, PMSG nhằm kích thích hoạt động của buồng trứng. Các hormon trên có thể được sử dụng riêng lẻ hoặc kết hợp với nhau nhưng phải tuân theo nguyên tắc: lấy ngày động dục của gia súc cho phôi làm mốc chuẩn (nếu như cấy phôi tươi) hoặc lấy mốc phôi 7 ngày tuổi làm chuẩn (đối với cấy phôi đông lạnh).
Progesteron hoặc các dẫn xuất của nó được đưa vào cơ thể cái nhận phôi ở bất cứ giai đoạn nào của chu kỳ động dục. Nếu đưa vào cơ thể dưới dạng tiêm thì ở khoảng thời gian từ ngày thứ 6 - 7, người ta tiến hành tiêm PGF 20t kết hợp với PMSG, còn nếu sử dụng dưới các dạng dụng cụ đặt âm đạo [ví dụ: PRID (Progesteron Releasing Intravaginal Decice), CIDR (Controlled Intemal Dụm Releasing) hay dạng viên cấp dưới da [SMB (Synchro Ma te Bự thì trong khoảng từ ngày thứ 8- 12, người ta bỏ các dụng cụ đó ra kết hợp tiêm PGF2α hoặc PMSG. Tất cả gia súc động dục đều được phối giống bằng thụ tinh nhân tạo.
Trong những đàn gia súc lớn, không cần phải xử lý bằng hormon để gây động dục đồng pha vì trong đàn luôn luôn có một số lượng cân bằng về động dục giữa những con nhận với những con cho phôi.
Trong kỹ thuật cấy truyền phôi, chỉ những con gia súc cái nhận phôi có chu kỳ động dục tương đương với những thời điểm động dục của những cái cho phôi mới được giữ lại. Sự phù hợp về chu kỳ động dục như vậy gọi là đồng pha hoàn toàn. Đây là điều kiện quyết định tới tỷ lệ đậu thai sau khi cấy phôi. Theo nghiên cứu của nhiều tác giả, tỷ lệ có chửa của bò khi được cấy phôi trong điều kiện đồng pha hoàn toàn là 9 1 %, sớm hơn 1 ngày (+1 ) là 57%, muộn hơn 1 ngày (-1 ) là 52% .
4.1. Kỹ thuật gây động dục đồng pha ở một số loài vật nuôi
Gây động dục đồng pha là kỹ thuật cho phép tạo ra sự phù hợp về trạng thái sinh lý sinh dục giữa con cái nhận phôi với con cái cho phôi hoặc phù hợp về trạng thái sinh lý sinh dục giữa con cái nhận phôi với tuổi phôi.
4 .1 .1 . Chuẩn bị con cái nhận phôi
Trong cấy truyền phôi, gia súc cái nhận phôi là những cơ thể mang thai giúp nên chúng không có ảnh hưởng tới kiểu di truyền của đời con mà chỉ tác động tới kiểu hình của đời con trong thời gian mang thai và nuôi con. Chính vì vậy mà tiêu chuẩn để con
để chọn cái nhận phôi, như sau:
- Có quá trình sinh trưởng, phát triển bình thường, cơ thể không quá béo hoặc quá gầy.
- Không bị dị tật, không mắc các bệnh di truyền và bệnh truyền nhiễm .
- Có trạng thái sinh lý bình thường, có ít nhất 2 chu kỳ sinh dục liền kề trước khi cấy phôi bình thường mang tính đặc trưng cho loài.
Về nguyên tắc, số lượng gia súc nhận phôi phải lớn hơn nhiều số lượng gia súc cho phôi. Ví dụ: Trong cấy truyền phôi bò, cứ một bò cái cho phôi cần chuẩn bị 20 bò cái nhận phôi để gây động dục đồng pha.
4.1.2. Gây động dục đồng pha ở bò
a/ Phương pháp phẫu thuật: Phương pháp đơn giản và xa xưa nhất gây động dục
đồng pha ở bò là khoét bỏ thể vàng. Sau khi khoét bỏ thể vàng, động dục được xuất hiện trở lại trong thời gian từ 2 - 7 ngày. Động dục gây ra bằng phương pháp khoét bỏ thể vàng thường xuyên kèm theo rụng trứng và tỷ lệ thụ thai cao. Phương pháp này không gây xuất huyết đến mức mà có thể gây chết động vật hoặc tạo ra sự dính bết gây ra vô sinh nhất thời hoặc vĩnh viễn. Tuy nhiên, do tính phức tạp của nó, kỹ thuật khoét bỏ thể vàng hiện nay đã được thay thế bằng cách sử dụng hormon sinh dục.
b/ Phương pháp dùng hormon sinh dục
Những thí nghiệm điều khiển bằng hoơnon sinh dục đầu tiên có từ năm 1948 bởi Christian và Casida. Hai ông đã sử dụng progesteron tiêm dưới da và tiêm bắp với liều thấp, hàng ngày hoặc là chỉ dùng một liều cao duy nhất. Hiện nay, khi áp dụng phương pháp này, người ta thường tiêm thêm benzoate oestradiol ở đầu xử lý và PMSG ở cuối xử lý.
Kết quả điều khiển hormon sinh dục theo cách này là tương đối khả quan. Tuy nhiên, những bất lợi của phương pháp này là ở chỗ thời gian áp dụng tương đối dài, bắt buộc phải sử dụng đến kim tiêm và tỷ lệ thụ thai ở lần động dục đầu tiên sau xử lý tương đối thấp.
Sự phát hiện ra progestagen tổng hợp đã mở ra con đường nghiên cứu mới và kết quả gây động dục đồng pha rất đáng ghi nhận trên bò, cừu và lợn. Các thử nghiệm sử dụng pmgestagen tổng hợp bằng cách cho uống, cấy dưới da hoặc đặt vào tử cung cho thấy cách cho uống trong một thời .gian ngắn (8 - 12 ngày) có hiệu quả gây động dục cao hơn và khả năng thụ tinh tết hơn.
Mức độ hiệu quả của phương pháp điều khiển hormon phụ thuộc vào bản chất của hormon điều khiển. Do yêu cầu của thực tiễn đòi hỏi các nghiên cứu theo hướng làm giảm đến mức thấp nhất lao động nên các phương pháp đặt hormon trong tử cung, cấy dưới da và cho uống được dùng khá phổ biến ở một số mô hình chăn nuôi. Các hormon thuộc nhóm steroid cũng được dùng để điều khiển quá trình động dục, các hon non progesteron, acetate fluorogesteron, norgestomet, Allyl - trenbolone được sử dụng
thường xuyên nhất. Thời gian đưa progestagen vào cơ thể trung bình là 12 ngày và được kết hợp với việc đưa thêm oestrogen ở thời gian đầu xử lý, PMSG vào lúc cuối của xử lý.
* Sử dụng progesteron
Để sử dụng progesteron gây động dục đồng pha, người ta dùng dụng cụ đặt âm đạo (PRID hoặc CIDR). PRID được cấu tạo bằng chất dẻo silicon, dạng vòng xoắn, chứa 2. loại hom lon: 1,55 g progesteron và 10 mở oestradiol benzoate.
- Cách sử dụng PRID: Sau khi lắp đặt xong PRID vào âm đạo con cái, người ta
để PRID nằm trong âm đạo con cái trong thời gian 12 ngày. Các hormon từ PRID tiết ra và thấm dần vào niêm mạc âm đạo, ngấm vào máu, làm cho hàm lượng progesteron tăng lên trong vòng 24 giờ và đạt tới mức 6-10 nghìn. Hàm lượng này được duy trì trên mức 5 người trong suốt thời gian PRID nằm trong âm đạo. Sau khi lấy PRID ra khỏi âm đạo 24 giờ, hàm lượng progesteron trong máu giảm xuống còn 0,5 người. Đây là hàm lượng thường gặp trong thời kỳ động dục. Trong khi đó, hàm lượng 1713 oestradiol trong máu tăng nhanh, đạt tới mức 20-30 pg/ml và được duy trì nhiều ngày
17β clestradiol có 2 tác dụng: kích thích sự phân hủy của các tế bào 1utein ở thể vàng và tạo điều kiện thuận lợi để hấp thu progesteron nội sinh do âm đạo sinh ra. Do sự phân hủy các tế bào lutein và ngay sau khi progesteron nội sinh bị loại bỏ, động vật chỉ chịu sự tác động của progesteron ngoại sinh và sự động dục đồng pha xảy ra.
Hàm lượng LH ở mức thấp trong suốt thời gian xử lý. Nhìn chung động dục xảy ra trong thời gian từ 48-60 giờ sau khi lấy PRID ra. Có khoảng 70% số động vật được xử lý bằng phương pháp này xuất hiện động dục. Ở bò cái tơ, kết quả gây động dục đồng pha bằng phương pháp này tết hơn những con bò cái đã sinh sản. Tỷ lệ đào thải PRID của bò ở mức thấp (không vượt quá 5%). Hầu hết những con bò được sử dụng PRID không có phản ứng đẩy ra. Tuy nhiên, khi lấy PRID ra đôi khi cũng kèm theo sự thải ra một ít dịch có mủ nhầy và hôi thối. Điều này không gây hậu quả nghiêm trọng vì sự thanh lọc của cơ thể diễn ra rất nhanh, dịch nhớt cổ tử cung hoàn toàn trở lại trong suốt khi diễn ra động dục đồng pha và tỷ lệ thụ thai rất khả quan.
Kỹ thuật gây đồng pha này được áp dụng ở cả con cái có hoạt động tính dục bình thường và những con cái có hoạt động tính dục không bình thường. Ở những con cái có hoạt tính dục không bình thường (chậm sinh sản, động dục ẩn, không động dục), nhất là các giống bò thịt, xử lý gây động dục đồng pha nên kết hợp với việc tiêm 500 IU PMSG vào ngày rút dụng cụ đặt âm đạo ra.
Thụ tinh nhân tạo hay giao phối tự nhiên được thực hiện dựa trên các biểu hiện động dục quan sát được hoặc là không phát hiện được. Trong trường hợp không phát hiện được động dục thì người ta tiến hành dẫn tinh nhân tạo hai lần vào lúc 48 và 72giờ sau xử lý cuối cùng. Nếu dẫn tinh nhân tạo một lần thì thời điểm dẫn tinh vào lúc 56 giờ sau xử lý cuối cùng. Tỷ lệ thụ thai đạt được bằng phương pháp này trên dưới 60%. Phương pháp này được sử dụng khá rộng rãi vì nó khá dễ dàng áp dụng và
cho kết quả tết
Khi sử dụng PRID cho bò cái nhận phôi, tỷ lệ động dục đạt 90-100%, tỷ lệ bò có thể vàng phát triển đạt 80-90%
Lịch trình sử dụng PRID
Ngày 0 Đặt PRID
Ngày 12 Rút PRID, có thể tiêm (hoặc không) 250-600 Ul PMSG Ngày 14 Theo dõi động dục và phối giống (hoặc phối giống cho tất
cả bò sau khi rút PRID 56 giờ)
Lịch trình sử dụng CIDR
CIDR là dụng cụ đặt âm đạo hỗn hợp giữa cao su và silicon, có hình chữ T hoặc chữ Y Trong dụng cụ này chứa 1,9 g progesteron tự nhiên, có tác dụng điều khiển chu kỳ động dục của bò cái tơ, bò cái sinh sản. Có thể sử dụng riêng lẻ CIDR hoặc kết hợp với PMSG, PGF2a hoặc Cidirol (oestradiol benzoate). Lịch trình sử dụng như sau:
- Đối với bò vắt sữa
Ngày 21 của chu kỳ Đánh dấu tất cả bò cái không có chu kỳ động dục
Ngày 0 Đặt CIDR+ Cidirol
Ngày 7 Rút CIDR, tiêm PGF2α
Ngày 9-12 Theo dõi và phối giống khi phát hiện động dục
Bò sẽ động dục trong vòng 4 ngày (ngày 9-12), con động dục sớm sẽ được dẫn tinh vào 48-56 giờ sau khi rút CIDR. Nếu bò không động dục, 18 ngày sau có thể đặt lại CIDR, nhưng thời gian đặt chỉ kéo dài 5 ngày.
Nếu dùng thụ tinh nhân tạo, không được chăn thả đực giống trong đàn kể từ khi rút CIDR cho đến 24 giờ sau khi phối tinh lần cuối
- Đối với bò cạn sữa
Ngày 21 của chu kỳ Đánh dấu tất cả bò cái có chu kỳ động dục xác định
Ngày 0 Kiểm tra tất cả bò không động dục và động dục không bình thường. Đặt CIDR+ Cidirol cho những bò này
Ngày 7 Rút CIDR, tiêm PGF2a cho những bò động dục và tiêm PMSG cho những bò không động dục
Ngày 9-12 Phối giống cho bò động dục
Ngày 25 Đặt cứu cho tất cả bò không động dục hoặc động dục không phát hiện được Tiêm PMSG cho bò động dục
Ngày 30 Rút CIDR
Ngày 32-34 Phối giống cho bò động dục
- Đối với bò sinh sản hướng thịt và sữa không động dục hoặc động dục không bình thường
Ngày 0 Kiểm tra và đặt CIDR + Cidirol Ngày 7 Rút CIDR, tiêm PMSG
Ngày 9-12 Phối giống cho bò động (48-96 giở sau khi rút CIDR). Đặt lại CIDR cho bò không động dục. Tiêm PGF2α cho bò nếu buồng trứng có thể vàng
- Đối với bò cái sinh sản hướng thịt đang cho con bú (không áp dụng cho con quá gày yếu hoặc mới đẻ)
Ngày21 Đánh dấu tất cả bò không động dục
Ngày 0 Đặt CIDR + Cidirol
Ngày 6 Tiêm PGF2α
Ngày 10 Rút CIDR
Ngày 12-14 Phối giống cho bò động dục, chuyển bê về với mẹ Đối với bò cái tơ hướng sữa và hướng thịt (gây đọng trục hàng loạn Ngày21 Đánh dấu tất cả bò không động dục
Ngày 0 Đặt chít + Cidirol cho bò không động dục
Ngày 6 Tiêm nửa liều PGF2α
Ngày 10 Rút CIDR
Ngày 12-13 Phối giống cho tất cả các bò trong khoảng 48-52 sau khi rút CIDR hoặc chỉ phối cho bò động dục
Ngày 28 Đặt lại chủ cho bò không động dục
Ngày 33 Rút CIDR
Ngày 35-36 Phối giống cho bò động dục
Sẽ có 90-95% bò động dục trong vòng 48-52 giờ sau khi rút CIDR. Nếu dùng thụ tinh nhân tạo, chỉ được thả bò đực vào đàn sau 24 giờ kể từ lần phối giống cuối cùng. Nếu không thụ tinh nhân tạo, thả bò đực vào đàn theo tỷ lệ 4-6%
* Sử dụng progestagen
Progestagen là chất tổng hợp, có hoạt tính như kích tố thể vàng buồng trứng. Khi đưa vào cơ thể, nó có tác dụng kìm hãm sự tiết kích tố sinh dục của tuyến yên, làm noãn bao tạm thời ngừng phát triển, do đó chu kỳ động dục tạm thời bị đình chỉ. Sau khi ngừng sử dụng, hàm lượng progestagen trong máu giảm đi một cách nhanh chóng, giải tỏa sự kìm hãm trung khu điều khiển sinh dục của tuyến yên, kích dục tố được bài tiết, gây lên hiện tượng động dục hàng loạt. Những progestagen tổng hợp được sử dụng nhiều nhất để gây động dục đồng pha cho bò là: MAP (Medroxy Axetat Progesteron) với liều 180 - 220 mg/con/ngày, CAP (Chlormadinon Axetat Progesteron) với liều 10 - 12 một con/ngày, MGA (Melegestal Axetat) với liều 0,5 - 2mg/con/ ngày. Những sản phẩm này được đưa vào cơ thể động vật bằng cách cho uống. Ngoài ra, còn có một loạt các chất thuộc nhóm Norgestomet
Norgestomet là một chất tồng hợp có tên hóa học là 17α - acetoxy - 11β - norpreg – 4ene, 3, 20, dione), được sử dụng dưới dạng mảnh cấy. Hình như toàn bộ những chất này cho thấy, nếu thời gian sử dụng dài sẽ làm giảm tỷ lệ động dục đồng pha và kéo theo tỷ lệ thụ thai thấp. Tuy nhiên, tỷ lệ thụ thai trở lại bình thường ở lần động dục thứ hai. Hiện tượng này có thể được giải thích là do liều cao của Norgestomet dẫn đến ức
chế mạnh hoạt động của trục đồi thị - tuyến yên cũng như là sự biến đổi quá mức của cấu trúc nội mô. Hiệu quả của xử lý gây động dục đồng pha bằng Norgestomet được cải thiện bằng cách giảm thời gian thời gian xử lý nếu như cung cấp thêm oestrogen và PMSG trong thời gian xử lý. Phương pháp này cũng có lợi để cải thiện tỷ lệ thụ tinh