- Mẫu làm giàu trên đất ô nhiễm
7 Loại clo của hợp chất chứa clo dạng acid
3.6. Sự có mặt của Dehalococcoides trong mẫu làm giàu
Các VK KK bắt buộc cũng có vai trò quan trọng trong quá trình phân hủy và chuyển hóa chất diệt cỏ/dioxin, đặc biệt là Dehalococcoides. Đây là VK khó nuôi cấy và phân lập ở dạng chủng sạch nhưng đã được xác định là có mặt trong lô xử lý cũng như tại vị trí ô nhiễm (mẫu P1, hồ A) bằng nested-PCR và DGGE. Vậy, chúng có thực sự có mặt và có liên quan như thế nào với các chủng đã được công bố, sự có mặt của Dehalococcoides trong các mẫu làm giàu được xác định.
3.6.1. Làm giàu vi khuẩn kỵ khí loại khử clo trên nguồn DCĐ, 2,4,5-T, 2,4-DCP
Các mẫu được lựa chọn bao gồm mẫu P1, P5 sau xử lý 10 tháng, mẫu 100DNT sau xử lý 10 năm, mẫu hồ A lấy cùng thời điểm với mẫu P1, P5 ở Đà Nẵng; các mẫu M1, M2, M3, M4 ở Biên Hòa sau 27 tháng. Các mẫu được làm giàu trên môi trường khoáng kỵ khí M204 với các chất nhận điện tử trong quá trình hô hấp loại clo là DCĐ, 2,4,5-T và 2,4-DCP. Quá trình làm giàu nhóm VK KK hô hấp loại clo trong đó có VK Dehalococcoides được đánh giá định tính bằng sự thay đổi màu sắc của các bình nuôi với chất chỉ thị màu là resaruzine (Ewald, 2007). Khi có mặt oxy, mẫu sẽ chuyển sang màu hồng và khi không có oxy (có sự sinh trưởng của nhóm VK KK), mẫu sẽ có màu từ đen nhạt đến đen đậm. Vi khuẩn hô hấp loại khử clo ở Đà Nẵng và Biên Hòa đã làm giàu được trình bày ở Hình 3.19.
A
B
Hình 3.19. VK KK hô hấp loại khử clo được làm giàu trên môi trường chứa 2,4-DCP, 2,4,5-T từ các mẫu đất ở Đà Nẵng (A) và Biên Hòa (B)
Từ Hình 3.19 cho thấy các bình nuôi cấy làm giàu đều có màu đen, bình đối chứng có màu hồng. Như vậy, các bình nuôi cấy làm giàu đều đảm bảo độ kỵ khí và đã có sự sinh trưởng của nhóm VK KK. Tuy nhiên, VK KK có khả năng sinh trưởng trên các hợp chất hữu cơ chứa clo khá phong phú, VK Dehalococcoides
thường sống trong quần xã có nhiều VK KK khác có hoặc không có khả năng loại khử clo. Các VK không có khả năng loại khử clo thường lên men các nguồn carbon hữu cơ tạo ra chất dinh dưỡng như pyruvate, formate và hydro (có vai trò là chất cho điện tử), vitamine B12 cung cấp cho Dehalococcoides sinh trưởng. Mặt khác, các VK khác trong quần xã còn duy trì điều kiện kỵ khí cho Dehalococcoides sinh trưởng và thực hiện chức năng loại khử clo các hợp chất ô nhiễm (Hug, 2012). Do
đó, các VK được làm giàu có mặt Dehalococcoides hay không sẽ được xác định ở nghiên cứu tiếp theo.
Dehalococcoides nói riêng và VK hô hấp loại khử clo ở điều kiện kỵ khí bắt buộc không dễ dàng nuôi cấy và phân lập bằng phương pháp truyền thống. Vì vậy, việc xác định hình thái tế bào cũng như nhân đoạn gene 16S rRNA với các cặp mồi đặc hiệu đã được sử dụng để xác định sự tồn tại của VK Dehalococcoides.