cấy lên hiệu quả chuyển gen
Trong thí nghiệm này, yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả chuyển gen được xem xét là mẫu tiền nuôi cấy và mẫu không tiền nuôi cấy, hai loại mẫu này được xâm nhiễm với dịch khuẩn có bổ sung 100 µM acetosyringone, thời gian ngâm 30 phút. Kết quả ghi nhận từ thí nghiệm cho thấy tỷ lệ biểu hiện GUS sau 2 ngày đồng nuôi cấy ở mẫu tiền nuôi cấy đạt 66,67 %, trong khi mẫu không tiền nuôi cấy chỉ đạt 54,17 %.
Bảng 4.3 Kết quả biểu hiện GUS ở mẫu tiền nuôi cấy và không tiền nuôi cấy
Mẫu Tỷ lệ mẫu biểu hiện GUS (%)
Mẫu đối chứng 0
Mẫu phôi không tiền nuôi cấy 54,17
Mẫu phôi tiền nuôi cấy 2 ngày 66,67
Khảo sát ảnh hưởng của mẫu tiền nuôi cấy và không tiền nuôi cấy nhằm làm tăng khả năng tái sinh của những mẫu có mang tế bào đã được biến nạp thành công. Kết quả từ bảng 4.3 cho thấy mẫu tiền nuôi cấy 2 ngày có tỷ lệ biểu hiện GUS cao hơn so với không tiền nuôi cấy, mặc dù sự khác biệt này không quá lớn. Điều quan trọng là sức sống của mẫu sau khi xâm nhiễm khuẩn ở mẫu tiền nuôi cấy cao hơn nhiều so với mẫu không tiền nuôi cấy.
Hình 4.5 Biểu hiện GUS ở mẫu phôi có tiền nuôi cấy và mẫu phôi không tiền nuôi
cấy; A. mẫu phôi tiền nuôi cấy 2 ngày, B. Mẫu phôi không tiền nuôi cấy; C. Đối chứng. Mũi tên đỏ chỉ vị trí biểu hiện GUS.
Kết quả này phù hợp với kết quả nghiên cứu của He và ctv (2008) khi cho rằng thời gian tiền nuôi cấy tốt nhất cho hiệu quả biểu hiện GUS trên một số loại mẫu
Jatropha là 2 ngày. Điều này có thể được giải thích mẫu không được tiền nuôi cấy đang bị tổn thương, chưa có thời gian thích ứng kịp. Khi tiến hành xâm nhiễm mẫu, vi khuẩn phát triển nhanh hơn bao phủ bề mặt mẫu sẽ làm giảm sức sống. Các báo cáo
A B của Sangwan và ctv, 1992; Michughen và ctv 1989 (trích dẫn bởi He và ctv, 2008) cho rằng mẫu trong quá trình tiền nuôi cấy sẽ kết hợp với các phytohormones có trong môi trường xúc tiến sự phân chia tế bào. Hoạt động phân chia tế bào có ảnh hưởng đến quá trình nhận và xác nhập của T-DNA. Vì vậy đây cũng là thời điểm tốt cho vi khuẩn xâm nhiễm vào mẫu.
Dựa vào tỷ lệ biểu hiện GUS và số lượng mẫu sống sau khi đồng nuôi cấy hai ngày, chúng tôi cho rằng mẫu tiền nuôi cho hiệu quả chuyển nạp gen cao hơn và nghiệm thức này đã được chọn để làm nguồn vật liệu để khảo sát hai thông số là nồng độ acetosyringone và thời gian ngâm mẫu.
Hình 4.6 Mẫu phôi Jatropha sau khi đồng nuôi cấy 2 ngày với vi khuẩn
A. tumefaciens; A. Mẫu tiền nuôi cấy; B. Mẫu không tiền nuôi cấy.