Phương pháp xâm nhiễm Agrobacterium vào hạt nảy mầm đã được thực hiện từ rất sớm trên một số đối tượng như ngô, đậu nành, Arabidopsis thaliana. Năm 1989, Chee và ctv đã tiến hành xâm nhiễm hạt đậu nành đang nảy mầm với vi khuẩn A. tumefaciens bằng cách tiêm trực tiếp dịch khuẩn vào vùng chồi đỉnh, vùng đốt lá mầm và các vùng lân cận. Efedi và ctv (1999) xâm nhiễm vi khuẩn vào mẫu đậu nành và đậu đỏ bằng ba cách: tiêm vào hạt đang nảy mầm, tạo vết thương kết hợp với đánh siêu âm và phương pháp hút chân không. Vì vậy, thí nghiệm này đã được tiến hành bắng cách bóc vỏ cứng của hạt Jatropha, đem đi ngâm nước 2 giờ, sau đó ủ trên giấy thấm rồi đặt trong tối ở nhiệt độ phòng 48h. Hạt sau khi hạt nảy mầm được tiến hành xâm nhiễm với vi khuẩn theo ba cách như sau:
Tiêm trực tiếp dịch khuẩn vào hạt: Tiêm khoảng 100 µl dịch khuẩn có bổ sung acetocyringone đạt nồng độ cuối 100 µM vào vùng chồi đỉnh của hạt. Hạt sau khi tiêm được ủ trên giấy thấm 24 giờ, sau đó đem ra đất trồng.
Lắc hạt với dịch khuẩn: Hạt sau khi được tạo vết thương bằng mũi dao đem ủ chung với dịch khuẩn trong bình tam giác có bổ sung acetocyringone đạt nồng độ cuối 100 µM, lắc ở 150 vòng/phút. Sau 6 giờ chuyển hạt lên đĩa petri có giấy thấm, tiếp tục ủ hạt 18 giờ, sau đó chuyển hạt ra đất trồng.
Chuyển gen kết hợp đánh sóng siêu âm: Hạt được ủ chung với dịch khuẩn có bổ sung acetosyringone đạt nồng độ cuối 100 µM, đem đánh siêu âm 2 phút, lắc 6 giờ ở 150 vòng/ phút. Sau đó chuyển hạt lên đĩa petri có giấy lọc. Khi ủ được 18 giờ, hạt được chuyển ra trồng trên đất.
Mỗi phương pháp được thực hiện 100 hạt. Chọn ngẫu nhiên 5 hạt trên một phương pháp đem tiến hành nhuộm GUS. Hạt được ủ trên đĩa petri có giấy thấm, sau 2 ngày, tách bỏ phần vỏ hạt lấy phần phôi và lá non bên trong tiến hành nhuộm GUS.
Cây con sau 3 tuần tuổi được sàng lọc bằng cách tiến hành phun PPT ở nồng độ nồng độ thấp nhất gây chết cây không chuyển gen đã được khảo sát.
Chỉ tiêu theo dõi: Ghi nhận tỉ lệ sống của hạt sau khi trồng ra đất, tỉ lệ biểu hiện GUS ở phôi và số cây sống sót sau khi được chọn lọc bằng PPT mỗi nghiệm thức.