2 .6 Chiết và tinh chế enzyme từ vi sinh vật
2.6.1 .Thu nhận enzym sạch từ nuôi cấy bề mặt:
Việc thu nhận enzym sạch từ nuôi cấy bề mặt bao gồm 2 giai đoạn:
2.6.1.1.Chiết rút enzym từ môi trường nuôi cấy bề mặt:
Công đoạn chiết rút enzym từ môi trường nuôi cấy bề mặt rất phức tạp.
Giai đoạn tinh chế dễ hay khó phụ thuộc rất nhiều vào công đoạn này. Khi tiến hành chiết rút enzym từ canh trường ta thu được không chỉ có enzym hòa tan trong nước mà còn thu được rất nhiều sản phẩm thủy phân từ cơ ché của môi trường và cà chất màu của chính nấm mốc tạo ra. Hiện nay có hai phương pháp chiết rút enzym từ canh trường nuôi cấy bề mặt:
a. Phương pháp thủ công:
Trong phương pháp thủ công chế phẩm enzym thô được nghiền nhỏ( nghiền bằng cối với các thạch anh hoặc với bột thủy tinh sau khi được xử lí sạch hoặc máy nghiền. Mục đích của quá trình này là làm tăng khả năng thu nhận enzym trong dịch chiết từ tế bào vi sinh vật. Dịch chiết thu nhận được từ phương pháp này rất đục do trong đó chứa rất nhiều chầt khác nhau.
b. Phương pháp chiết rút enzym bằng các thiết bị khuếch tán.
Trong phương pháp chiết rút bằng các thiết bị khuếch tán, các enzym được chuyển từ tế bào vào nước do sự chêch lệch nồng độ enzym từ tế bào vào nước. Thiết bị dùng cho quá trình này bao gồm nhiều thiết bị khuếch tán được lắp đặt nối tiếp nhau. Quá trình khuếch tán được thực hiện như sau:
Nước (dung môi) được đưa từ bể khuếch tán chứa chế phẩm nấm mốc có hàm lượng enzym và các chất tan khác thấp nhất. Dung dịch sau khi khuếch tán chứa nồng độ enzym cao hơn sẽ đi từ bể khuếch tán có chế phẩm nấm mốc mới nạp vào. Như vậy, vấn đề trở nên phức tạp trong điều hành. Để dễ hiểu ta xem cách vận hành cụ thể như sau:
Chế phẩm nấm mốc được đưa vào bể khuếch tán thứ nhất, đồng thời ta đưa nước vào, giữ chế phẩm nấm mốc trong nước một thời gian. Tuần tự như vậy ta tiến hành với tất cả các bể còn lại. Dòng chảy của dịch khuếch tán từ bể này sang bể khác sẽ làm giàu hơn lượng khuếch tán vào. Dịch khuếch tán cuối cùng sẽ được bơm vào bể thu nhận và từ bể khuếch tán thứ nhất, sau khi tháo bã nấm mốc được nối vào vị trí cuối cùng của dãy khuếch tán. Khi đó bể khuếch tán thứ hai trong lúc này của bể thứ nhất. Trong quá trình
khuếch tán, nhiệt độ được duy trì là 25-280C và cho thêm focmalin để tránh nhiễm trùng. Dịch khuếch tán hay dịch chiết enzym được cô đặc dưới áp suất thấp trong chân không để hàm lượng chất khô ít hơn 50-55%.