2 .6 Chiết và tinh chế enzyme từ vi sinh vật
2.6.2 Thu nhận enzym từ phương pháp bề sâu:
Dung dịch lên men từ phương pháp nuôi cấy bề sâu, sau khi tách khối vi sinh vật chứa hàm lượng chất khô rất thấp (khoảng 1 – 3 %). Do đó, để giảm chi phí dung môi hoặc muối trung tính trong quá trình kết tủa ta phải cô đặc dung dịch này.
Phương pháp cô đặc phải sao cho hoạt tính dung môi không thay đổi. Muốn vậy dung dịch phải được cô chân không ở nhiệt độ thấp, khoảng 25 – 300C. Lượng dịch sau cô đặc sẽ giảm 4 – 10 lần. Phương pháp tốt nhất là cho dịch qua cột nhựa trao đổi ion hoặc các chất hoạt động bề mặt. Hiện nay, người ta áp dụng một số phương pháp thu nhận enzym từ dịch lọc của phương pháp bề mặt sâu như sau:
a.Phưong pháp thu nhận enzym bằng phương pháp kết tủa nhờ dung môi hữu cơ hoặc bằng muối trung tính từ dịch chiết của canh trường nuôi bề mặt. Dịch nuôi cấy từ phưong pháp bề sâu phải làm cô đặc lại. Thao tác và các yêu cầu kỳ thuật tương tự như phương pháp thu nhận kết tủa enzym từ môi trường nuôi cấy bề mặt.
b.Phương pháp hấp thụ hoàn toàn bởi silicagen. Được thực hiện ở pH 4,7 – 4,9. Cách tiến hành được thực hiên như sau: cho dịch enzym chảy qua cột nạp đầy silicagen. Sau đó tách silicagen ra. Để tăng quá trình hấp phụ, người ta cho thêm 6 – 20% NaCl. Sau đó silicagen được rửa bằng photphat natri ở pH= 8 – 8,4 hoặc bằng cacbonat natri 2%. Bằng cách này ta có thể thu được nước lọc từ canh trường nuôi cấy bề sâu xuống 8 – 10 lần. Sau đó rút enzym ra, silicagel được tái sinh lại bằng cách nung ở nhiệt độ 160 – 1700C hoặc cũng có thể xử lí bằng HCl 1N và rửa cẩn thận bằng nước cất.
Dung lượng hấp thụ của 1 gam silicagel là 60 – 120 - amilaza.