Kjeldahl)
Nguyên lý: cho mẫu tác dụng với H2SO4đđ, khi đun nóng Nitơ trong protein sẽ bị phân giải thành NH3. Nhờ có H2SO4 hiện diện, NH3 sẽ biến thành
35
(NH4)2SO4, cho tác dụng với NaOH, NH3 lại thoát khỏi dung dịch. Căn cứ vào lượng acid đã tiêu hao để trung hòa lượng NH3, từ đó tính được lượng NH3, lượng nitrogen tổng số và suy ra lượng protein thô.
Phản ứng xảy ra như sau
Nitơ trong mẫu thức ăn CO2 + H2O + (NH4)2SO4
(NH4)2SO4 + 2NaOH Na2 SO4 +NH4OH NH4OH NH3 + H2O
NH3 + H3PO4 NH4H2BO3
NH4H2BO3 + H2SO4 H3BO4 + NH4HSO4
Mẫu trắng: mẫu phân tích được cân khoảng 0,5 gram cho vào bình Kjeidahl, sau đó cho tiếp một ít chất xúc tác (9 phần K2SO4 + 1 phần CuSO4), 2 giọt H2O2 30% và 10 ml dung dịch H2SO4 đậm đặc, để yên trong một ngày, sau đó đem lên lò công phá đạm cho đến khi mẫu trắng hoàn toàn.
Mẫu được đem chưng cất: cho 15 ml acid boric 2% vào bình tam giác 250 ml, đưa vào máy, cấm đầu ống mủ vào đáy bình (cho acid boric ngập đầu ống mủ). Mẫu (sau khi đã công phá trắng) cho vào bình đựng mẫu của máy đã có sẵn 1 ít nước cất, tráng sạch mẫu nhiều lần bằng nước cất, tiếp tục cho 40 ml NaOH 50% vào bình đựng mẫu. Sau đó cho nước cất vào đến khoảng 3/4
bình, đậy kính tất cả các nút của bình chứa mẫu, mở nước và bật bếp điện. Chưng chất đến khi dung dịch trong bình tam giác được khoảng 200 ml, lấy bình tam giác ra rửa sạch mẫu dính trong ống mủ xuống bình tam giác, tắt bếp. Sau đó, lấy bình đựng mẫu ra khỏi hệ thống chưng cất rửa sạch, cứ tiếp tục như vậy làm bình khác.
Định phân: mẫu sau khi đã chưng cất xong đem định phân bằng dung dịch H2SO4 0.1N, định phân cho đến khi dung dịch trong bình tam giác đổi màu (từ màu xanh chuyển sang màu hồng nhạt) thì dừng lại đọc kết quả.
36
Công thức tính:
%N =
V: thể tích dung dịch H2SO4 0,1N dùng để định phân mẫu (ml) V’: thể tích dung dịch H2SO4 0,1N dùng để định phân mẫu trắng (0,005ml)
W: trọng lượng mẫu (g)
%CP = %N*6,25