ựến khả năng nhân chồi
Một trong những thành công của quá trình nuôi cấy in vitro thực vật là trong thời gian ngắn cho số lượng cây giống lớn, ựể ựạt ựược ựiều này giai ựoạn nhân nhanh ựóng vai trò ựặc biệt quan trọng, ảnh hưởng trực tiếp tới hệ số nhân hay nói cách khác là tổng số cây trên một ựơn vị thời gian. Nếu tăng hệ số nhân cao thì sẽ giảm ựược chi phắ và thời gian nhân giống cây in vitro
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 38
Muốn tăng hệ số nhân cần tăng số lượng chồi phát sinh trên một mẫu cấy và tăng kắch thước của của mỗi chồi hình thành. để làm ựược ựiều này chúng ta cần sử dùng chất kắch thắch sinh trưởng. Kế thừa các kết quả nghiên cứu của nhiều công trình trước tác giả lựa chọn 3 loại chất kắch thắch sinh trưởng là GA3, Kinetin và BAP ở các mức nồng ựộ 0,5mg/l; 1,0mg/l; 1,5mg/l và 2,0mg/l bổ sung vào MTN ựánh giá riêng rẽ ựể lựa chọn ra chất kắch thắch sinh trưởng tốt nhất cho các thắ nghiệm tiếp theo.
3.2.1. Ảnh hưởng của nồng ựộ GA3 ựến khả năng nhân nhanh chồi
GA3 (Giberellic acid 3) là chất ựiều tiết sinh trưởng không thể thiếu trong nuôi cấy mô thực vật. Chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 thuộc nhóm Giberellic Acid, GA3 có tác dụng kắch thắch kéo dài chồi và tăng cường sự bật mầm mắt ngủ của chồi hay củ (Nguyễn Như Khanh, 2002). Kế thừa các kết quả nghiên cứu về chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 trong nuôi cấy in vitro cây khoai lang nói riêng và các loài cây trồng khác nói chung. đề tài ựã tiến hành thắ nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng của nồng ựộ GA3 ựến hệ số nhân chồi và chất lượng chồi 3 tổ hợp khoai lang CIP29 x CL6; VC971 x Dâu ựỏ và KLT10 x HL6 Ờ 3. Sử dụng môi trường nuôi cấy cơ bản là MTN = MS + 3% Saccarose + 0,8% Agar bổ sung GA3 với các nồng ựộ: 0mg/l (đC); 0,5mg/l; 1,0mg/l; 1,5mg/l và 2,0 mg/l (pH 5,8). Kết quả nghiên cứu ựược trình bày tại bảng 3.3, hình 3.3 và hình 3.4:
Bảng 3.3. Ảnh hưởng của nồng ựộ GA3 ựến số lá, chiều cao chồi và hệ số nhân chồi sau 4 tuần nuôi cấy
Nồng ựộ GA3
Số lá TB Chiều cao TB (cm) Hệ số nhân chồi
TH1 TH2 TH3 TH1 TH2 TH3 TH1 TH2 TH3 0mg/l 4,1 4,0 3,9 3,2 3,4 3,4 1,07 1,06 1,03 0,5mg/l 4,6 4,7 4,2 5,8 5,5 5,4 1,33 1,23 1,19 1,0mg/l 5,0 5,1 5,0 7,9 7,7 7,8 2,01 1,93 1,89 1,5mg/l 4,6 4,7 4,5 8,0 7,9 7,9 1,50 1,33 1,34 2,0mg/l 4,6 4,6 4,2 7,6 7,5 7,3 1,21 1,18 1,16 CV% 1,9 2,0 1,9 LSD5% 0,49 0,49 0,45
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 39
Kết quả nghiên cứu thể hiện tại bảng số liệu 3.3 cho thấy, khi bổ sung chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 với các nồng ựộ khác nhau vào môi trường nuôi cấy ựã cải thiện hệ số nhân chồi so với công thức ựối chứng (không bổ sung nồng ựộ GA3). Cụ thể, khi sử dụng chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 với các nồng ựộ tăng dần từ 0,5 mg/l ựến 1,0 mg/l ựã làm tăng hệ số nhân chồi của các tổ hợp khoai lang thắ nghiệm (từ 1,33 lần lên 2,01 lần ựối với tổ hợp CIP29 x CL6, từ 1,23 lên 1,93 lần ựối với VC971 x Dâu ựỏ và từ 1,19 lên 1,89 lần ựối với KLT10 x HL6 Ờ 3). Tuy nhiên, khi nồng ựộ chất ựiều tiết sinh trưởng ựược tăng lên cao hơn ở các 1,5mg/l và 2,0mg/l thì hệ số nhân chồi của 3 tổ hợp khoai lang CIP29 x CL6; VC971 x Dâu ựỏ và KLT10 x HL6 Ờ 3 lại giảm dần. đây có thể do sự ức chế của nồng ựộ chất ựiều tiết sinh trưởng ựến khả năng nhân chồi mẫu cấy. Hệ số nhân chồi ở các công thức giảm chỉ còn 1,16 - 1,21 lần. để sự quan sát trực quan ựược ựơn giản tác giả trình bày hệ số nhân chồi trong thắ nghiệm này tại hình 3.2.
Hình 3.3: Ảnh hưởng của nồng ựộ chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 ựến khả năng nhân chồi
3 tổ hợp khoai lang
Bằng trực quan quan sát biểu ựồ dễ dàng nhận thấy ở hình 3.3, công thức bổ sung nồng ựộ 1,0 mg/l GA3 cho hệ số nhân chồi ựạt cao nhất ở cả 3 tổ hợp
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 40
khoai lang thắ nghiệm. Hệ số nhân chồi ở công thức này của các tổ hợp lần lượt là 2,01 lần (tổ hợp CIP29 x CL6); 1,93 lần (tổ hợp VC971 x Dâu ựỏ) và 1,89 lần (KLT10 x HL6 Ờ 3). Kết quả phân tắch hệ số nhân chồi ở công thức bổ sung 1,0mg/l GA3 so với các công thức thắ nghiệm còn lại là có sự sai khác có ý nghĩa với mức tin cậy 95%. đối với các tổ hợp thắ nghiệm thì hệ số nhân chồi ở nồng ựộ 1,0 mg/l GA3 không có sự chênh lệch lớn.
Như vậy, bổ sung vào môi trường nuôi cấy 1,0 mg/l GA3 cho hệ số nhân chồi ựạt tỷ lệ cao nhất ở cả 3 tổ hợp khoai lang thắ nghiệm là có ý nghĩa. Tiến hành ựánh giá các chỉ tiêu như chiều cao trung bình của chồi và số lá trung bình trên chồi ở các công thức thắ nghiệm cho thấy, bổ sung chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 vào môi trường nuôi cấy ựã kắch thắch phát triển sự kéo dài thân của chồi khoai lang trên cả 3 tổ hợp, tuy nhiên số lá trên chồi không cao chỉ ựạt trung bình từ 4,2 Ờ 5,1 lá/chồi. Chiều cao trung bình của chồi tăng cao tương ứng với nồng ựộ chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 bổ sung vào môi trường nuôi cấy. Cụ thể, khi tăng nồng ựộ GA3 từ 0,5 mg/l lên 1,5 mg/l thì chiều cao chồi tăng từ 5,4 cm Ờ 8,0 cm (trung bình của 3 tổ hợp). Tuy nhiên, khi vượt qua ngưỡng nồng ựộ cho phép thì chiều cao chồi bắt ựầu có xu hướng giảm dần (ở các công thức có nồng ựộ GA3 từ 1,5mg/l ựến 2,0mg/l ở cả 3 tổ hợp CIP29 x CL6; VC971 x Dâu ựỏ và KLT10 x HL6 Ờ 3).
đánh giá chất lượng chồi bằng cảm quan cho thấy, các công thức bổ sung chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 vào môi trường nuôi cấy cho chất lượng chồi kém hơn so với công thức ựối chứng. Chồi khoai lang ở các công thức thắ nghiệm bị kéo dài nên rất gầy, lá thưa và diện tắch lá nhỏ, màu sắc chồi kém xanh. Kết quả theo dõi số lá trung bình và chiều cao trung bình của thắ nghiệm ựược thể hiện trên hình 3.4 ựể tiện cho việc quan sát và so sánh.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 41
Hình 3.4. Ảnh hưởng của nồng ựộ chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 ựến chất lượng chồi 3
tổ hợp khoai lang
Từ các kết quả ựánh giá trên có thể kết luận, nồng ựộ chất ựiều tiết sinh trưởng GA3 thắch hợp nhất cho nhân chồi khoai lang ựược bổ sung vào môi trường nuôi cấy là 1,0 mg/l.