Phương pháp tách chiết ADN tổng số

● Nguyên tắc: Tế bào thực vật được nghiền vỡ trong điều kiện làm lạnh làm cho ADN được hòa tan trong dung dịch. SDS được thêm vào giúp ADN dễ hòa tan hơn.

Quy trình tách chiết ADN sử dụng bộ kit chiết tách ADN thực vật Plant Tissue (Solution Type) của hãng Solgen Co. Ltd gồm các bước sau:

- Nghiền mẫu trong nitơ lỏng bằng dụng cụ nghiền tissue lyser II. - Chuyển mẫu đã nghiền vào ống 1,5mL.

- Thêm 300L dung dịch ly giải tế bào vào mẫu. - Ủ ở 650C trong 60 phút, lắc đảo ống 10 phút/lần. - Thêm 1L RNAse A (4mg/mL) vào dịch tế bào ly giải. - Lắc đảo 50 lần và ủ ở 370C trong 60 phút.

- Làm mát đến nhiệt độ phòng và thêm 100L dung dịch tủa protein vào dịch tế bào. - Lắc đảo 50 lần.

- Ly tâm với tốc độ 12.000 vòng/phút trong 5 phút.

- Chuyển dịch trong sang ống 1,5 mL chứa 300L isopropanol 100% . - Lắc đảo 50 lần nữa.

- Ly tâm với tốc độ 12.000 vòng/phút trong 5 phút (các vi hạt ADN sẽ tạo thành và lắng xuống).

- Loại bỏ dịch nổi, làm khô ống bằng giấy thấm sạch.

- Thêm 500L ethanol 80% và lắc đảo vài lần để rửa sạch hạt ADN.

- Ly tâm với tốc độ 12.000 vòng/phút trong 5 phút. Đổ từ từ dịch ethanol, thu tủa. - Làm khô trong không khí ở nhiệt độ phòng trong 15 phút.

- Thêm 40L ADN hydration solution vào tủa ADN. - Hydrat hóa ADN bằng cách ủ mẫu ở 650C trong 1h. - Bảo quản ADN ở -200C đến -800C [48].