sinh gelatinase cao
a. Bố trí thí nghiệm phân lập chủng vi khuẩn có khả năng sinh gelatinase
Hình 2.2. Sơ đồ bố trí thí nghiệm phân lập chủng vi khuẩn có khả năng sinh gelatinase
- Mục đích: Phân lập được những chủng vi khuẩn có khả năng sinh
gelatinase.
- Tiến hành: Chuẩn bị mẫu phân lập như sau:
+ Mẫu 1:lấy mẫu đất xung quanh hàng cá tại chợ Vĩnh Thọ, Nha Trang.
+ Mẫu 2: lấy các mẫu cá hay da cá bị phân hủy xung quanh các rãnh thải hàng cá chợ Vĩnh Thọ, Nha Trang.
+ Mẫu 3: mẫu đất (đã ủ da cá đến phân hủy) xung quanh khu dân cư Tháp Bà. Chuẩn bị các đĩa môi trường gelatin-agar vô trùng.
Cân 2g mỗi mẫu hòa vào trong 20 ml nước muối sinh lý vô trùng lắc đều, sau đó để ổn định 15 phút. Cấy ria mẫu lên đĩa môi trường gelatin-agar đã chuẩn bị và ủ mẫu trong tử ẩm ở 37oC, 48 giờ.
Sau thời gian nuôi cấy, quan sát sự hình thành các khuẩn lạc trên các mẫu đã cấy phân lập. Những khuẩn lạc có hình thái khác nhau sẽ được chọn và làm thuần.
Mẫu phân lập
Tách các khuẩn lạc đặc trưng Cấy trên môi trường MT1
Giữ chủng Tạo chủng thuần
b. Bố trí thí nghiệm kiểm tra khả năng sinh gelatinase của các chủng vi khuẩn phân lập
- Mục đích: tuyển chọn các chủng vi khuẩn có khả năng sinh gelatinase của
các chủng phân lập
- Tiến hành: Chuẩn bị bị các đĩa môi trường gelatin-agar vô trùng. Lấy một ít
khuẩn lạc của mỗi chủng phân lập cấy chấm lên đĩa môi trường đã chuẩn bị. Mẫu sau khi cấy được đưa đi ủ trong tủ ẩm ở 37oC, 48 giờ.
Sau thời gian nuôi cấy, quan sát khả năng tạo vòng kháng của các chủng vi khuẩn đã cấy. Những chủng có tạo vòng phân giải xung quanh khuẩn lạc sẽ được tuyển chọn cho nghiên cứu tiếp theo.
Hình 2.3. Sơ đồ bố trí thí nghiệm phân lập chủng có khả năng sinh gelatinase
c. Bố trí thí nghiệm tuyển chọn chủng vi khuẩn sinh gelatinase cao nhất từ các chủng phân lập
- Mục đích: Tuyển chọn được chủng vi khuẩn có khả năng sinh gelatinase cao nhất.
- Tiến hành: Chuẩn bị các đĩa thạch môi trường gelatin-agar vô trùng. Dùng
viết kính kẻ bên ngoài đáy đĩa thạch thành nhiều ô vuông nhỏ (2,5 x 2,5cm). Các chủng vi khuẩn tuyển chọn được ký hiệu và cấy chấm tương ứng lên từng ô nhỏ của các đĩa thạch đã chuẩn bị và ủ trong tủ ẩm ở 37oC, 72 giờ.
Chủng vi khuẩn phân lập
Kiểm tra vòng phân giải Cấy trên môi trường gelatin-agar
Giữ chủng Chủng sinh gelatinase
Sau thời gian nuôi cấy, tiến hành đo đường kính khuẩn lạc và đường kính vòng phân giải xung quanh khuẩn lạc đó và xác định tỷ lệ giữa đường kình vòng phân giải với đường kình khuẩn lạc tương ứng với mỗi chủng.
Chủng vi khuẩn có tỷ lệ đường kính vòng phân giải/đường kính khuẩn lạc lớn nhất sẽ được chọn cho nghiên cứu tiếp theo.
Hình 2.4. Sơ đồ bố trí thí nghiệm tuyển chọn chủng vi khuẩn sinh gelatinase cao nhất từ các chủng vi khuẩn phân lập