Salmonella phân lập được
Từ môi trường ta đã phân lập ở trên, chọn khuẩn lạc nghi Salmonella, kiểm tra hình thái, kích thước 0,4 - 0,6 × 1 - 3µm, không có giáp mô, không sản sinh nha bào, di động được do có lông, từ 7 - 12 lông (trừ Salmonella
pollorum và Salmonella gallinarum), bắt màu Gram âm.
Các thử nghiệm sinh hóa chính cần thực hiện cho Salmonella là: lên men đường glucose (+), lactose (-), manitol (+), H2S (+), Indole (-), urease (-), catalase (+).
- Kiểm tra khả năng sinh Indole của vi khuẩn:
Phương pháp tiến hành: Lấy khuẩn lạc từ đĩa thạch đã cấy thuần vào môi trường Nutrient Broth, bồi dưỡng trong tủ ấm ở 37oC trong 18 - 24 giờ, vi khuẩn sẽ sinh trưởng, phát triển và sản sinh Indole (nếu có). Tiến hành kiểm tra bằng cách nhỏ giọt 2 - 3 giọt dung dịch Kovac’s vào ống nghiệm.
Đọc kết quả:
+ Phản ứng dương tính: Trên bề mặt môi trường xuất hiện một vòng nhẫn màu đỏ tím hay màu hồng (đó là phản ứng kết hợp giữa Kovac’
s màu cafe và Indole không màu).
+ Phản ứng âm tính: Không có sự thay đổi màu. - Phản ứng catalase:
Phương pháp tiến hành: Lấy một phiến kính sạch, dùng que cấy cẩn thận lấy một phần của khuẩn lạc đặt lên giữa phiến kính. Nhỏ một giọt hydrogen peroxidaza (H2O2) lên vùng có khuẩn lạc.
Đọc kết quả: Phản ứng được cho là dương tính nếu ngay sau khi nhỏ chất phản ứng, bọt khí được hình thành. Ngược lại không có bọt khí hình thành, kết quả âm tính.
- Sản sinh urease:
Phương pháp tiến hành: Dùng que cấy vòng lấy lượng sinh khối lớn từ khuẩn lạc của chủng thuần vào ống chứa 3ml môi trường Urea Broth vô trùng, lắc nhẹ ống để trộn đều vi khuẩn để ở 37oC trong 24 giờ.
Đọc kết quả: Phản ứng là dương tính khi môi trường chuyển từ màu vàng cam sang màu đỏ cánh sen. Khi môi trường giữ nguyên màu vàng cam là âm tính.
- Phản ứng oxidase:
Phương pháp tiến hành: Lấy vi khuẩn từ môi trường Nutrient Agar đặt lên giấy thấm. Nhỏ thuốc thử TMPD (Tetramethyl - ρ - phenylenediamine). Quan sát sau 30 giây.
Đọc kết quả:
+ Phản ứng dương tính: Sinh khối chuyển màu xanh. +Phản ứng âm tính: Sinh khối vẫn màu trắng.
- Khả năng dung huyết:
Phương pháp tiến hành: Dùng que cấy lấy khuẩn lạc từ đĩa thạch đã nuôi cấy, cấy ria lên đĩa thạch máu. Sau đó để ở 37oC trong 24 giờ, quan sát sự thay đổi trên đĩa thạch.
Đọc kết quả: Có 3 kiểu dung huyết:
+ Dung huyết hoàn toàn: Vòng dung huyết trong vào rõ.
+ Dung huyết không hoàn toàn: Xung quanh và dưới khuẩn lạc chuyển đục và có màu khác.
+ Không dung huyết: Hoàn toàn không dung huyết. - Lên men đường:
Phương pháp tiến hành: Dùng que cấy lấy khuẩn lạc, sau đó cấy ria trên bề mặt thạch nghiêng TSI, để trong tủ ấm.
Đọc kết quả:
+ Nếu vi sinh vật chỉ lên men glucose, sau 18 - 24 giờ nuôi cấy phần môi trường bề mặt của ống thạch nghiêng trở lên có pH kiềm và phần sâu trong ống có pH axit. Nếu trong môi trường có chất chỉ thị là đỏ phenol thì trên mặt thạch nghiêng sẽ có màu đỏ và phần sâu sẽ có màu vàng.
+ Nếu vi sinh vật có thể sử dụng cả glucose và lactose, sau 18 - 24 giờ nuôi cấy, toàn bộ môi trường trở lên có pH axit (do quá trình oxy hóa và quá trình lên men) và có màu vàng. Tuy nhiên, nếu kéo dài thời gian nuôi cấy quá 24 giờ, bề mặt môi trường có thể trở thành màu đỏ do hết nguồn cacbon nên vi sinh vật phải sử dụng đến pepton.
+ Nếu vi sinh vật không sử dụng được cả 2 nguồn cacbon này, thì peton được sử dụng để biến dưỡng thu năng lượng và vật chất cần cho sự tăng trưởng của vi sinh vật. Tuy nhiên, do peton chỉ được biễn dưỡng trong điều kiện hiếu khí nên hiện tượng kiềm hóa môi trường chỉ diễn ra trên bề mặt môi
trường và chỉ phần này trở lên có màu đỏ, phần môi trường sâu trong ống nghiệm sẽ không có sự đổi màu.
- Khả năng sinh H2S:
Phương pháp tiến hành: Dùng que cấy thẳng cấy sinh khối từ khuẩn lạc của chủng thuần vào phần sâu của ống thạch nghiêng (tránh chạm đáy ống), sau đó ria trên bề mặt thạch nghiêng để ở tủ ấm 37oC trong 24 giờ. Ghi nhận màu và sự sinh khí ở phần sâu, màu ở mặt thạch nghiêng, sự tạo thành màu đen bởi FeS.
Đọc kết quả:
+ Phản ứng dương tính: Khi phần thạch đứng có màu đen. + Phản ứng âm tính: Khi phần thạch đứng không có màu đen. - Tính di động của vi khuẩn:
Phương pháp tiến hành: Cấy đâm sâu vi sinh vật vào môi trường thạch mềm (0,5%).
Đọc kết quả:
+ Vi sinh vật di động sẽ làm môi trường đục, phát triển lan ra khỏi vết cấy. + Vi sinh vật không di động sẽ phát triển quanh đường cấy, môi trường không bị đục.