- Sử dụng kháng huyết thanh đơn giá.
- Nguyên lý: Đối với kháng nguyên hữu hình, khi gặp kháng thể đặc hiệu tương ứng thì các vi khuẩn sẽ kết lại với nhau thành đám lớn mà mắt thường ta có thể quan sát được. Đây là phản ứng ngưng kết, sự kết hợp giữa kháng nguyên và kháng thể nhanh và xảy ra trên phiến kính.
- Chuẩn bị: Khuẩn lạc vi khuẩn được nuôi cấy vào ống thạch dinh dưỡng, để trong tủ ấm ở nhiệt độ 37oC trong 24 giờ.
+ Kháng huyết thanh đơn giá. + Que cấy vô trùng loại 1µl.
+ Phiến kính lõm 24 giếng, bông cồn, nước sinh lý, đèn cồn. - Tiến hành:
+ Trên phiến kính lõm 24 giếng, nhỏ vào một giọt kháng huyết thanh, sau đó dùng que cấy vô trùng loại 1µl lấy 1 vòng vi khuẩn trên môi trường thạch dinh dưỡng, hòa tan trong kháng huyết thanh.
- Đọc kết quả:
+ Phản ứng dương tính khi có sự hình thành các hạt ngưng kết li ti phân bố đều sau 30 giây khi cho kháng huyết thanh.
+ Phản ứng âm tính khi huyết dịch vi khuẩn và kháng huyết thanh không có hiện tượng ngưng kết, huyễn dịch vẩn đục đều.
+ Trong trường hợp nếu vi khuẩn có khả năng tự ngưng kết (tức là khi cho vi khuẩn hòa với nước muối sinh lý có hình thành ngưng kết nhiều hoặc ít) thì chủng này được coi là tự ngưng kết và không thử nghiệm tiếp theo để phát hiện kháng nguyên nữa.
Khi xác định kháng nguyên H của vi khuẩn Salmonella phải nuôi cấy vi khuẩn vào các môi trường để tạo các pha riêng biệt của kháng nguyên H.
Cách bộc lộ các pha của kháng nguyên H:
- Cấy vi khuẩn cần định type vào môi trường thạch dinh dưỡng (được đổ nghiêng trong ống nghiệm) để tạo pha 1.
- Cấy vi khuẩn vào môi trường thạch Gard (thạch có bổ sung kháng huyết thanh nhằm ức chế pha 1) để tạo ra pha 2 của kháng nguyên H.
Tiến hành định type theo bảng định type huyết thanh học của vi khuẩn
Salmonella theo sơ đồ của Kauffman - White (1972) [34].