2.3.2.1. Định tính bằng phương pháp hóa học
Nhóm –OH phenol
Các dẫn chất của acid salicylic cho phức màu với dung dịch FeCl3, do nhóm OH phenol tạo phức với FeCl3.
Nhóm chức acid -COOH
Các chất có nhóm chức acid COOH , khi cho tác dụng với NaHCO3 sẽ sủi bọt khí.
R-COOH + NaHCO3 → RCOONa + H2O + CO2↑
Dẫn bọt khí qua bình chứa dung dịch Ca(OH)2, khí tạo thành làm đục dung dịch trong bình
CO2 + Ca(OH)2 → CaCO3 ↓ + H2O
Nhóm chức ester
Các ester không tạo bọt khí khi cho tác dụng với natri bicarbonat.
Khi bị thủy phân bằng cách đun nóng trong NaOH 10 %, sau đó acid hóa trở lại, sản phẩm vừa tạo thành sẽ sủi bọt khí trong NaHCO3.
R-COOR’ + NaOH → RCOONa + R’OH
RCOONa + HCl → RCOOH + NaCl
RCOOH + NaHCO3→ RCOONa + H2O + CO2↑
CO2 + Ca(OH)2 → CaCO3 ↓ + H2O
Nhóm chức hydrazid
Các chất có chứa chức hydrazid có tính khử sẽ cho phản ứng tráng gương với AgNO3 .
R-CONH-NH2 + AgNO3 / NH4OH → RCOOH + NH4NO3 + Ag↓ + NH3
Nhóm thế halogen
Vô cơ hóa sản phẩm trong dung dịch KOH 17 %, rửa cắn, nước rửa thêm HNO3 10 % (pH khoảng bằng 3), thêm dung dịch AgNO3 1 % → tủa từ trắng đến vàng nhạt AgX. [10]
KX + AgNO3 → AgX↓ + KNO3 với : X = Cl; Br; I
Nhân rhodanin
Có thể định tính nhân rhodanin bằng phản ứng ngưng tụ với PDAB tạo sản phẩm có màu đỏ đặc trưng.
Các sản phẩm vừa tổng hợp được hòa trong acid acetic băng, thêm vài tinh thể PDAB và 2 giọt dimethylamin, đun nóng → xuất hiện tủa màu đỏ đậm.
Nhóm –NO2
Đun sản phẩm với HCl và bột kẽm trong 3 phút, để nguội và làm lạnh đến 0-5 oC, cho thêm dung dịch NaNO2 0,1N lắc đều. Sau đó cho thêm vài giọt
β- Naphtol / NaOH → xuất hiện màu đỏ cam của phẩm màu azoic.
Tủa đỏ cam
2.3.2.2. Xác định nhiệt độ nóng chảy
Nhiệt độ nóng chảy được đo trên máy đo nhiệt độ nóng chảy STUART - SMP3. Nhiệt độ được đo 3 lần tính kết quả trung bình.
Sản phẩm tạm coi là tinh khiết khi nhiệt độ nóng chảy giữa hai lần tinh chế chênh lệch không quá ± 0,5 oC.
2.3.2.3. Sắc ký lớp mỏng
Kiểm tra độ tinh khiết của sản phẩm bằng sắc ký lớp mỏng Tiến hành trên bản mỏng Silicagel 60 F254 tráng sẵn (Merck).
Các hệ dung môi:
Dung môi A: cloroform - acid acetic (9 :1) Dung môi B: cloroform - ethyl acetat (3 : 7)
Dung môi C: cloroform - ethyl acetat - methanol (20 : 20 : 2) Dung môi D: toluen - ethyl acetat - methanol (31 : 8 : 1) Dung môi E: toluen - ethyl acetat - methanol (15 : 4 : 1) Dung môi F: toluen - ethyl acetat - methanol (15 : 4 : 2,5) Dung môi G: n-hexan - ethyl acetat (1 : 1)
Dung môi H: n-hexan - ethyl acetat (2 : 1) Dung môi I: n-hexan - aceton (5 : 2) Dung môi J: cloroform - methanol (40:1)
Dung môi K: cloroform - ethyl acetat - acid acetic (10 : 5 : 1) Dung môi L: cloroform - ethanol - acid acetic (20 : 2 : 1) Dung môi M: cloroform - ethyl acetat - acid acetic (9 : 4 : 1) Dung môi N: cloroform - methanol - amoniac (10 : 2 : 1) Dung môi O: cloroform - aceton - amoniac (10 : 2 : 1) Dung môi P: cloroform - ethyl acetat - amoniac (8 : 4 : 1) Dung môi Q: cloroform - methanol (15 : 3)
Dung môi R: cloroform - ethyl acetat - methanol (10 : 10 : 4) Dung môi S: cloroform - aceton - methanol (10 : 10 : 4)
Mẫu thử: dung dịch mẫu thử có nồng độ khoảng 2 mg/ml trong ethanol tuyệt đối, chấm khoảng 5 μl.
Thứ tự vết chấm trên bản mỏng (hình 2.1):
1 – Sản phẩm
2– Hỗn hợp sản phẩm và nguyên liệu. 3 – Nguyên liệu.
Phát hiện vết bằng đèn tử ngoại ở bước sóng 254nm.
Hình 2.1: sắc ký đồ
2.3.2.4. Phổ hồng ngoại (IR)
Phổ hồng ngoại được đo trên máy FTIR 8101 của hãng Shimadzu và máy FTIR Alpha của hãng Bruker, với kỹ thuật dập viên KBr.
Bảng 2.2 : Đỉnh đặc trưng trong phổ IR của các dẫn chất thiazolidin
Đỉnh hấp thu (cm-1) Kiểu dao động Nhóm chức
1700-1750 1600-1700 1400-1600 1010-1105 v N-C=O v C=O v C=C v C=S Nhân rhodanin Amid Nhân thơm Nhân rhodanin 2.3.2.5. Phổ tử ngoại (UV)
Mẫu thử được pha loãng trong ethanol tuyệt đối (Prolabo). Quét phổ trên máy UV-2010 Spectrophotometer của hãng HITACHI và máy UV-3200 Spectrophotometer của hãng LABOMET
Các chất tổng hợp được dự kiến đều có nhân thơm nên thường cho dải hấp thu ở vùng 200-400 nm.
2.3.2.6. Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H NMR và 13C NMR)
Phổ 1H NMR được đo trên máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân BRUKER AV - 500 MHz (tần số 500 MHz).
Bảng 2.3: Dịch chuyển hóa học của các proton thuộc dẫn chất thiazolidin
Chuyển dịch hóa học (ppm) Vị trí của proton
8,0-6,5 -C6H5
4,5-4,0 >CH2
4,0-3,8 C6H5-OCH3
3,0-2,8 C6H5-N(CH3)2
Phổ 13C NMR được đo trên máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân Bruker AV - 500 MHz (tần số 125 MHz).
Bảng 2.4: Dịch chuyển hóa học của các carbon thuộc dẫn chất thiazolidin
Chuyển dịch hóa học (ppm) Vị trí của carbon
170-200 >C=S (thiazolidin) 165-170 >C=O 128,5 ± 35 -C=C- (nhân thơm) 55,0-60,0 C6H5-OCH3 40,0-45,0 C6H5-N(CH3)2 2.3.2.7. Khối phổ
Khối phổ các chất được đo trên máy FT- ICR- MS hãng VARIAN. Ion hóa mẫu theo phương pháp ESI (electrospray ionization).