Mục đích của thí nghiệm nhằm chọn ra tác nhân tủa phù hợp, tiến hành kết tủa protease B. amyloliquefaciens CT3 ra khỏi dịch nuôi cấy bằng aceton, etanol, sulphate amon ở cùng nồng độ gây kết tủa enzyme là 70%. Sau đó ly tâm thu CPE protease của chủng B. amyloliquefaciens CT3 (CPE B), hòa tan trong nước cất rồi dẫn đến thể tích như nhau và xác định hoạt độ theo phương pháp Anson cải tiến mục 2.3.8. Kết quả nghiên cứu thể hiện ở bảng 3.13.
Bảng 3.13. Hiệu suất thu hồi CPE B bởi các tác nhân tủa khác nhau Tác nhân tủa Tổng hoạt độ trước khi tủa (UI/100ml)
Tổng hoạt độ sau khi
tủa Hiệu suất
thu hồi (UI/100ml)
Etanol 248,4 ± 0,25 127,84 ± 0,56 51,47 %
Aceton 248,4 ± 0,25 121,24 ± 0,76 48,81 % Sulphate amon 248,4 ± 0,25 125,77 ± 0,37 50,63 %
Kết quả được trình bày tại bảng 3.13, biểu đồ 3.4 cho thấy khi kết tủa protease bằng ethanol ở nồng độ 70% thì CPE B thu được hoạt độ tương đương với CPE B thu được khi kết tủa bằng amoni sulphate và cao hơn kết tủa bằng aceton ở cùng nồng độ. Hiệu suất thu hồi cao nhất bởi tác nhân tủa etanol đạt 51,47%, có thể giải thích nguyên nhân làm cho hiệu suất thu hồi không cao là:
- Các enzyme sau khi tủa hoặc tinh sạch có xu hướng kết tụ lại. Điều này ảnh hưởng rất nhiều đến hoạt tính của enzyme do các trung tâm phản ứng bị vùi lấp bên trong và không phục hồi được sau khi hòa tan trở lại.
- Do thời gian có hạn nên chúng tôi thực hiện tủa enzyme bằng các tác nhân tủa ở cùng nồng độ. Đây là tỉ lệ tham khảo từ các đề tài nghiên cứu thu nhận và tinh sạch enzyme protease khác. Vì vậy đây là kết quả chưa tối ưu để tủa protase từ dịch nuôi cấy của chủng B. amyloliquefaciens CT3.