Nguyên tắc
Chất đạm được vô cơ hóa bằng H2SO4 đậm đặc thành amon sulphate ((NH4)2SO4). Muối này đem tác dụng với kiềm mạnh như NaOH sẽ giải phóng amoniac.
Sau đó, lượng amoniac được hơi nước lôi cuốn sang một bình tam giác có chứa một lượng thừa H2SO4. Từ đây cho phép chúng ta xác định được lượng amoniac phóng thích ra, có nghĩa là xác định lượng nitrogen trong mẫu nguyên liệu.
2NH4OH + H2SO4 → (NH4)2SO4 + H2O
Cách tiến hành
* Vô cơ hóa mẫu
Lấy 6 ống phá mẫu, thực hiện ba sự thử thật, ba sự thử không. Cân chính xác 0,1g nguyên liệu khô nghiền nát vào ba ống thử có, hút chính xác vào ba ống thử không mỗi bình 1ml nước cất.
Tiếp theo cho vào mỗi ống 0,5g xúc tác và 5ml H2SO4 đậm đặc, nối bộ thu khí và bắt đầu phá mẫu. Khi thời gian phá mẫu kết thúc để ống phá mẫu nguội.
Lấy 6 ống phá mẫu ra, lắp vào máy chưng cất. * Chưng cất
Lắp ống phá mẫu vào máy chưng cất, bổ sung 10ml NaOH 40%. Khởi động quá trình chưng cất, dịch chưng cất chuyển sang bình tam giác có chứa sẵn 10ml dung dịch H2SO4 có chỉ thị màu.
* Chuẩn độ
Sau khi quá trình chưng cất đạm (6 – 7 phút) kết thúc lấy bình tam giác ra định phân với dung dịch NaOH 0,1 N.
Cho dung dịch NaOH 0,1 N vào Buret, định mức tới vạch không. Nhỏ từ từ dung dịch NaOH 0,1 N vào bình tam giác tới khi dung dịch chuyển từ màu hồng xám bẩn sang màu xanh lá mạ thì dừng chuẩn độ.
Thực hiện ba sự thử thật, ba sự thử không để lấy giá trị TB. Phải xác định hệ số hiệu chỉnh X của dung dịch NaOH N/10 bằng dung dịch H2SO4 N/10.
Tính kết quả
Số gam nitơ tổng có trong 100g nguyên liệu
% N = V. X . 0,0014. 100/m (g/100g nguyên liệu) Trong đó :
V0: Thể tích dung dịch NaOH 0,1N trung bình của 3 lần thử không. Vt :Thể tích dung dịch NaOH 0,1N trung bình của 3 lần thử thật.
ΔV = Vt – V0: Lượng NaOH tương ứng với NH3 phóng thích. 0,0014: Số gam nitơ tương ứng với 1ml NaOH.
X: Hệ số hiệu chỉnh dung dịch NaOH 0,1N. 100: Hệ số phần trăm.
m: Khối lượng mẫu thử.
Hàm lượng protein (%) = % N . 6,25