THỰC PHẨM
1. Nguyên tắc
Salmonella là vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae, cĩ hình que Gram âm, khơng sinh bào tử, sống hiếu khí tùy nghi nhưng phát triển tốt trong điều kiện hiếu khí. Hầu hết cĩ khả năng di động nhờ tiêm mao. Hầu hết cĩ khả năng tạo H2S (trừ S. typhi) Cĩ khả năng lên men sinh acid từ glucose, mannitol, khơng lên men lactose, sucrose, khơng tạo Indol. Cĩ khả năng tạo enzyme lysine decarboxylase. Hiện diện trong nhiều loại thực phẩm. Đây là nhĩm đối tượng vi sinh vật nguy hại, cĩ thể gây ngộ độc với mật độ thấp (khoảng 1 triệu tế bào/g). Trong hầu hết các loại thực phẩm, chỉ tiêu Salmonella luơn bằng 0 (khơng được phép phát hiện trong thực phẩm).
Quá trình phân tích Salmonella thường bao gồm bốn bước: tăng sinh, tăng sinh chọn lọc, phân lập và khẳng định. Bước tăng sinh chọn lọc thường dùng các loại mơi trường chuyên biệt tuỳ vào nguồn mẫu thu nhận được. Bước khẳng định nhằm xác nhận các khuẩn lạc đặc trưng cho Salmonella xuất hiện trên mơi trường phân lập. Bước này dựa trên việc sử dụng các thử nghiệm sinh hố và thử nghiệm huyết thanh đặc trưng cho Salmonella.
2. Dụng cụ, mơi trường và hĩa chất2.1. Dụng cụ 2.1. Dụng cụ
STT Tên dụng cụ, thiết bị mỗi nhĩm (3 sinh viên) Đơn vị tính Số lượng Ghi chú
1 Giá ống nghiệm Cái 1
2 Ống nghiệm Ф18 Cái 15
3 Bình tam giác 250ml Cái 1
4 Cốc 100ml Cái 1 5 Bình tia Cái 1 6 Pipette 1ml Cái 5 7 Pipette 10ml Cái 1 8 Micropipette 100-1000μl Cái 1 9 Đầu týp 1000μl Cái 1
STT Dụng cụ dùng chung Đơn vị tính Số lượng Ghi chú
1 Nồi hấp cao áp Cái 1
2 Tủ cấy vơ trùng Cái 1
3 Tủ sấy Cái 1
4 Máy dập mẫu Cái 1
5 Bút đếm khuẩn lạc Cái 1
2.2. Mơi trường và hố chất
- Dung dịch BPW - Mơi trường SCB - Mơi trường XLD - Mơi trường KIA
- Nước muối sinh lý 0,9% - Nước cất vơ trùng.
- Thuốc nhuộm tím kết tinh - Dung dịch lugol
- Thuốc nhuộm Fuschin - Cồn 96o
2.3. Nguyên liệu khác
- Mẫu thịt gà tươi - Túi nilon dập mẫu
- Dịch vi khuẩn Salmonella kiểm chứng
3. Tiến hành thí nghiệm
3.1. Tiền tăng sinh và tăng sinh chọn lọc
- Thực hiện đồng nhất 25g mẫu thực phẩm vào trong 225ml dịch BPW. Ủ ở 370C trong 16-24 giờ.
- Sau thời gian ủ, tiến hành cấy chuyền 0,1ml dịch vi sinh vật được tiền tăng sinh sang mơi trường tăng sinh chọn lọc là SCB hoặc RV (nên dùng cả hai loại mơi trường đồng thời). Ủ ở 370C trong 24 giờ.
- Các ống dương, nghi ngờ cĩ sự hiện diện của Salmonella, khi mơi trường cĩ màu đỏ gạch, cĩ cặn lắng, cĩ thể cĩ váng.
3.2. Phân lập Salmonella
a. Mơi trường phân lập
Phân lập Salmonella trên một trong các mơi trường sau: * Mơi trường SS Agar (Salmonella - Shigella agar) - Thành phần: - Cao thịt : 5g - Pepton : 5g - Lactose : 10g - Mật bị : 8,5g - Natri Citrat : 8,5g - Natrithiosulphat : 8,5g - Sắt Citrat : 10g - Brilliant green 0,1% : 0,33ml - Đỏ trung tính1% : 2,5ml - Agar : 13,5g - Nước cất , đủ : 1000ml
Cách pha: Đun sơi để hịa tan hồn tồn thành phần trên trong nước cất, để nguội tới 450C, trong nồi cách thủy, rĩt vào mỗi hộp petri 15 - 20ml mơi trường. Khơng hấp thanh trùng mơi trường. Chỉnh pH = 7,0 ở 250C
* Mơi trường thạch Mac Conkey - Thành phần: - Pepton : 20g - Lactose : 10g - NaCl : 5g - Mật bị :1,5g - Cristal violet 0,1% : 1ml - Đỏ trung tính 1% : 3ml - Agar : 13,5g - Nước cất, đủ :1000ml
Cách pha: Đun sơi để hịa tan các thành phần trên trong nước cất, chỉnh pH là 7,2 ở 250C. Hấp thanh trùng ở 1210C trong 15 phút
* Mơi trường Xylose lysine desoxycholate agar (XLD)
- Cao nấm men :3g - NaCl :5g - D(+) xylose :3.5g - Lactose :7.5g - Sucrose :7.5g - L(+) lysine :5.0g - Sodium desoxycholate :2.5g - Sodium thiosulphate :6.8g - Ammonium iron (III) citrate :0.8g
- Phenol red :0.08g
- Agar :15g
- Nước cất 1 lít - pH 7.4 ± 0.2
Đun sơi mơi trường, khơng hấp, để nguội đến 500C rồi đổ đĩa, khơng giữ quá 1 ngày.