PETRIFILM
1. Nguyên tắc
Petrifilm là màng quét lên một lớp chất dinh dưỡng và tác nhân tạo gel. Khi tiến hành xét nghiệm, 1mL mẫu được cấy vào Petrifilm và ủ. Chất màu đặc biệt trên đĩa khiến các khuẩn lạc cĩ màu đặc trưng dễ dàng phân biệt bằng mắt thường. Các đường kẻ ơ giúp cho việc đếm số lượng khuẩn lạc dễ dàng hơn. Các phương pháp Petrifilm đã được thử nghiệm và được AOAC cơng nhận.
Đĩa Petrifilm E.Coli/Coliform Count (EC) cĩ chứa Violet Red Bile (VRB), chất gel tan được trong nước lạnh, chất chỉ thị hoạt động của glucuronidase và một chất chỉ thị giúp cho việc đếm khuẩn lạc dễ dàng hơn. Hầu hết E.coli (khoảng 97%) sinh beta-glucuronidase, chất này tạo tủa màu xanh gắn kết với khuẩn lạc. Tấm film phía trên giữ bọt khí sinh ra từ quá trình lên men lactose của E.coli và coliforms. Khoảng 95% E.coli cĩ sinh bọt khí, cho khuẩn lạc cĩ màu từ xanh đến xanh – đỏ kèm theo bọt khí trên đĩa Petrifilm.
AOAC INTERATIONAL và U.S FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) xác định Coliforms là trực khuẩn gram âm, hình que, sinh hơi và acid suốt quá trình lên men chuyển hố lactose. Khuẩn lạc coliform phát triển trên đĩa Petrifilm EC sinh acid, chất chỉ thị pH trong đĩa làm cho lớp keo cĩ màu đỏ. Khí sinh ra được giữ lại xung quanh khuẩn lạc Coliform màu đỏ là dấu hiệu để xác định Coliform
Trong bài thực hành này chúng ta sẽ tiến hành định lượng Coliforms trong nước giải khát ngồi đường phố (giới hạn cho nước giải khát khơng cồn khơng đĩng chai đối với Coliforms chai 10 CFU/1g, theo QĐ 867/1988 của Bộ y tế) bằng Petrifilm và phương pháp hộp trải truyền thống để so sánh.
2. Dụng cụ, mơi trường và hĩa chất2.1. Dụng cụ 2.1. Dụng cụ
STT Tên dụng cụ, thiết bị mỗi nhĩm (3 sinh viên) Đơn vị tính Số lượng Ghi chú
1 Giá ống nghiệm Cái 1
2 Ống nghiệm Ф18 Cái 15
3 Bình tam giác 250ml Cái 1
4 Cốc 100ml Cái 1 5 Bình tia Cái 1 6 Pipette 1ml Cái 5 7 Pipette 10ml Cái 1 8 Micropipette 100-1000μl Cái 1 9 Đầu týp 1000μl Cái 1
STT Dụng cụ dùng chung Đơn vị tính Số lượng Ghi chú
1 Nồi hấp cao áp Cái 1
2 Tủ cấy vơ trùng Cái 1
3 Tủ sấy Cái 1
4 Máy dập mẫu Cái 1
5 Bút đếm khuẩn lạc Cái 1
2.2. Mơi trường và hố chất
- Tấm petrifilm dùng phân tích coliform và Escherichia coli
- Nước muối sinh lý 0,9% - Nước cất vơ trùng. - Cồn 96o
2.3. Nguyên liệu khác
- Thịt tươi
- Túi nilon dập mẫu
- Dịch vi khuẩn Escherichia coli kiểm chứng