[91]
2.4.3.1 Xử lý bệnh phẩm
Quan sát thể tích và màu sắc dịch não tuỷ: độ trong, đục, có lẫn máu…
Soi trực tiếp
- Dùng pipet vô trùng hút dịch ở đáy ống bệnh phẩm
- Nhỏ 1-2 giọt lên lam kính, để nguyên giọt và làm khô bằng máy sấy lam.
- Tiến hành nhuộm Gram
Trên tiêu bản nhuộm Gram: phát hiện bất cứ loại vi khuẩn nào đều được coi là tác nhân gây bệnh
2.4.3.2 Nuôi cấy và phân lập vi khuẩn
35-370C
Nuôi cấy và phân lập các loại vi khuẩn trong dịch não tủy theo các bước sau:
Tiến hành nuôi cấy ngay sau khi nhận được bệnh phẩm.
- Sử dụng pipet vô trùng hút dịch ở đáy ống bệnh phẩm. Nhỏ 2-3 giọt lên môi trường thạch máu và socola. Cấy phân vùng bằng que cấy vô trùng trên mỗi đĩa.
- Nếu thể tích dịch não tủy chỉ hơn 1ml, bệnh phẩm từ não thất hoặc ống thông thì hút 1ml dịch não tủy vào canh thang nuôi cấy.
- Nếu lượng bê ̣nh phẩm chỉ khoảng 1-5 giọt
Sử dụng pipet Pasteur vô trùng hút 1 giọt lên lam kính để nhuô ̣m Gram.
Bổ sung 0,5ml canh thang vào ống bệnh phẩm. Đậy nắp, trô ̣n đều.
- Ủ ấm môi trường đĩa thạch máu và thạch socola ở 350
- 370 C với khí trường 5-10% CO2/24h
- Ủ ấm canh thang ở 350
C-370C/24h trong tủ ấm thường.
Diễn giải kết quả nuôi cấy
- Kiểm tra tất cả đĩa nuôi cấy và canh thang BHI sau 24h. Nếu không xuất hiện khuẩn lạc và canh thang không đục thì tiếp tục ủ ấm.
- Đọc các đĩa nuôi cấy hằng ngày trong vòng 4 ngày.
- Nếu kết quả nhuộm Gram dương tính, không xuất hiện khuẩn lạc trên đĩa nuôi cấy hoặc có yêu cầu cấy nấm phải giữ đĩa ít nhất trong vòng 1 tuần
- Kiểm tra môi trường canh thang trong vòng 4 ngày và loại bỏ nếu canh thang trong sau 7 ngày.
- Nếu có khuẩn lạc sau nuôi cấy, thông báo ngay cho bác sỹ kết quả nuôi cấy sơ bộ dương tính và tiến hành định danh loài vi khuẩn phân lập được.
- Nếu môi trường canh thang đục cấy chuyển 2 môi trường thạch máu và thạch socola. Rồi tiếp tục định danh vi khuẩn theo quy trình