a. Hóa chất.
Các loại đƣờng sử dụng để kiểm tra đặc tính hóa sinh của loài vi khuẩn
Nocardia sp. nhƣ: mannitol, glucose, galactose, arabinose, sucrose, maltose, mannose.
Các loại hóa chất dùng cho test hóa sinh: H2O 2,Paraffin, NaCl...
Bộ kít tách chiết DNA: DNeasy® Blood and Tissue Kits (QIAGEN, Đức).
- Dung dịch Buffer AW1. - Dung dịch Buffer AW2. - Dung dịch Buffer AE.
- Enzymatic lysis buffer ( 20 mM Tris-Cl, pH = 8,0; 2mM Sodium EDTA; 1,2 % Triton X – 100; 200mg / ml lysozyme).
- Ethanol (96 – 100%) . - Proteinase K 20mg/ml. Hóa chất điện di
- Dung dịch đệm Tris – borat/ EDTA 10X (TBE): 108g Tris base, 55g acid boric, 40ml EDTA 0,5M
- Ethidium bromide 10mg/ml - Thang DNA chuẩn 100 - 1000kb
- Agarose tinh khiết. Hóa chất cho PCR.
- Nƣớc không chứa RNase, DNase do công ty Promega cung cấp.
- Cặp mồi N5F1 và N5R1 do công ty IDT (Integrated DNA Technologies tổng hợp ) có trình tự nhƣ sau:
- Mồi xuôi N5F1: 5' -TGA GCC TGA ACT GCA TGG TTC-3'. (21nu) - Mồi ngƣợc N5R1: 5'-ACG GTA TCG CAG CCC TCT GTA-3'. (
21 nu)
- Master Mix (1,5mM MgCl2, 0,16 mM dNTP, 1U Taq DNA polymerase, 2,5 µl RCR buffer minus 1X) đƣợc cung cấp bởi công ty Promega.
b. Môi trƣờng.
Môi trƣờng Ogawa
- Dịch muối khoáng bao gồm: Kaliđihydrosunphát (KH2PO4) 3%, Sodium glutamate 3%, NaCl 6%
- Dung dịch malachite green, 2% - Dịch trứng gà
- Dung dịch glycerol
Trộn đều kỹ 300 ml dung dịch muối khoáng, 18ml dung dịch malachite green 2%, 600ml trứng gà và 18 ml glycerol. Điều chỉnh pH của hỗn hợp này là 6,8. Sau đó phân phối môi trƣờng từ 6 - 8 ml vào mỗi ống nghiệm đã tiệt trùng. Để ống nghiệm nghiêng một góc 45º
và làm đông các ống môi trƣờng này bằng cách đặt vào tủ sấy ở nhiệt độ 80 – 85ºC trong thời gian 45 phút. Khi môi trƣờng đã rắn lại sẽ có màu xanh lá chuối non.
Môi trƣờng BHI (cho 1L môi trƣờng) - Nutrient substrate: 27,5g. - D (+) Glucose: 2,0g. - Sodium chlorire: 5,0g.
- Huyết thanh bê (Newborn Calf Serum): 2%
Thành phần môi trƣờng O-F (Oxidation-Fermentation Medium). - NaCl: 5,0g.
- Agar: 3,0g. - Peptone: 2,0g. - K2HPO4: 0,3g.
- Carbohydrate solution: 100,0mL.
- Bromthymol Blue Solution (0,2%): 15,0mL. - pH 7,1 - 7.3.
Môi trƣờng TSI (60g/1000ml nƣớc cất).(có sẵn) c. Thuốc thử.
Thuốc nhuộm Tím Violet: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Tím Violet: 1 g. - Ethylic: 1 g. - Phenol tinh thể: 2 g.
- Nƣớc cất vô trùng : đủ 100ml Thuốc nhuộm Lugol:
- Iod tinh thể: 1 g. - KI: 2 g. - Nƣớc cất vô trùng: đủ 100 ml. Thuốc nhuộm Fuschsine:
- Fuschin kiềm: 1 g. - Rƣợu ethylic 95%: 10 ml. - Phenol tinh thể: 5 g. - Nƣớc cất vô trùng: đủ 100ml.