Các phản ứng sinh hóa truyền thống nhƣ OF, KIA, khả năng di động, catalase, oxidase, và khả năng lên men các loại đƣờng nhƣ: Arabinose, glucose, mantiol sucrose, galactose, manose, maltose đã đƣợc thực hiện làm cơ sở cho việc định danh vi khuẩn theo hệ thống phân loại của Bergey đƣợc trình bày bởi Holt J.G và cs (xuất bản lần thứ 9,1994).
a. Tính di động
Dùng phiến kính sạch, nhỏ lên phiến kính một giọt canh khuẩn, sau đó đậy lá kính lên, quan sát kính hiển vi quang học 40 X.
b. Phản ứng Oxidase
Dùng que cấy lấy một khuẩn lạc cho tiếp xúc trên que thử oxidase. Quan sát que thử trong 30 giây và quan sát sự thay đổi màu sắc: que thử chuyển màu xanh đậm cho phản ứng oxidase dƣơng tính (+) và không chuyển màu là âm tính (-).
c. Phản ứng Catalase
Nhỏ một giọt dung dịch H2O2 3% lên lame. Dùng que cấy triệt trùng lấy một ít vi khuẩn cho vào dung dịch H2O2 3%. Phản ứng Catalase dƣơng tính khi có hiện tƣợng sủi bọt và ngƣợc lại catalase âm tính không sủi bọt.
d. Khả năng lên men và oxy hóa đƣờng glucose (O/F test).
Chuẩn bị 2 ống nghiệm chứa môi trƣờng O/F đã tiệt trùng ở 121ºC trong 15 phút. Dùng que cấy tiệt trùng lấy vi khuẩn thuần trong ống thạch nghiêng và cấy thẳng vào2 ống nghiệm chứa môi trƣờng O/F, sau đó phủ 0,5-1 ml dầu paraffin tiệt trùng vào một ống nghiệm tạo điều kiện yếm khí trong ống nghiệm (F). Ống còn lại
sẽ kiểm tra tính hiếu khí của vi khuẩn (O). Để 2 ống nghiệm vào trong tủ ấm 28ºC. Đọc kết quả sau 1-7 ngày.(Dựa vào bảng 2.1).
Bảng 2.1. Bảng đọc kết quả của O/F test Ống tiếp xúc không
khí Ống phủ dầu paraffin Kết quả
Xanh lá cây Xanh lá cây Không phản ứng với
glucose
Xanh lơ ở phần trên Xanh lá cây Phản ứng kiềm tính
Vàng Xanh lá cây Phản ứng oxy hóa
Vàng Vàng Phản ứng lên men
e. Khả năng sinh H2S Các bƣớc thực hiện:
+ Đun và khuấy cho tan hoàn toàn môi trƣờng TSI + Tiệt trùng ở 121ºC trong 15 phút. Để nguội ở 45ºC. + Cho khoảng 5ml môi trƣờng vào ống nghiệm.
+ Để nghiêng ống nghiệm tạo một mặt phẳng nghiêng.
+ Cấy vi khuẩn trên bề mặt nghiêng và mặt đứng của ống nghiệm. + Ủ ở 28ºC. Đọc kết quả sau 14-28 giờ.
Vi khuẩn sinh H2S cho màu đen trong ống nghiệm. f. Khả năng sử dụng các loại đƣờng
Các bƣớc thực hiện:
+ Môi trƣờng: Các dung dịch đƣờng mannitol, glucose, galactose, arabinose, sucrose, mantolse, mannose có bổ sung thêm2% NaCL và 2% nấm men (thích hợp với loại vi khuẩn kháng acid)
+ Cấy vi khuẩn vào các ống nghiệm. Ủ trong tủ ấm ở 28ºC. + Sau 48 giờ đọc kết quả.
Phản ứng dƣơng tính khi ống nghiệm chuyển sang màu vàng và ngƣợc lại.