2.3.4.1 Phương pháp cho chuột ăn và xác định khối lượng chuột
- Chuột được cho ăn thức ăn đã bổ sung chế phẩm βCR. Lượng thức ăn hằng ngày chỉ bằng 1/2 nhu cầu thực tế của chuột (half-feed) để đảm bảo chúng ăn hết, không bỏ thức ăn thừa [5]. Thức ăn được cung cấp cho chuột 2 lần/ngày (vào 8 giờ và 20 giờ).
- Khối lượng của chuột được xác định 3 ngày một lần.
- Sau mỗi 3 ngày, khẩu phần ăn của chuột được tăng lên một lần.
2.3.4.2 Phương pháp đếm số lượng hồng cầu
- Pha dung dịch trộn hồng cầu Marcano gồm Na2SO4: 5 g; formol: 1 ml; nước cất: 100 ml. Bảo quản trong điều kiện phòng và sử dụng trong tuần;
- Vệ sinh buồng đếm và ống trộn;
- Chích gốc đuôi chuột, dùng ống trộn hồng cầu hút máu đến vạch 0,5. Hút tiếp dung dịch trộn hồng cầu đến vạch 10 (máu được pha loãng 200 lần). Lắc đều ống trộn hồng cầu, bỏ 3 giọt đầu, cho một giọt lên buồng đếm hồng cầu và xác định số hồng cầu trong buồng đếm;
- Đếm số hồng cầu trong 5 ô lớn (80 ô nhỏ) trên buồng đếm được giá trị A. Đếm lặp
lại 3 lần [125]. Số tế bào hồng cầu trong 1 mm3 máu: N = A x 10000
2.3.4.3 Phương pháp đếm số lượng bạch cầu
- Dung dịch trộn bạch cầu gồm acid acetic 5 ml; xanh methylen 2 đến 5 giọt; nước cất vừa đủ 100 ml;
- Thao tác tương tự đếm hồng cầu (mục 2.3.4.2);
- Đếm số bạch cầu trong 25 ô lớn (400 ô nhỏ) trên buồng đếm được giá trị B. Đếm lặp
lại 3 lần [125].
2.3.4.4 Xác định hàm lượng hemoglobin
Dựa trên sự oxi hóa hemoglobin và sự chuyển hóa methahemoglobin thành cyanmethahemoglobin có màu đỏ bởi dung dịch Drabkin (hỗn hợp sodium bicarbonate, potassium cyanic, potassium ferricyanic) người ta có thể xác định được hàm lượng hemoglobin bằng phương pháp đo OD ở bước sóng 540 nm [13].
2.3.4.5 Phương pháp thu nhận chất thải từ lồng nuôi chuột
- Chuột được nuôi 02 ngày với thức ăn có bổ sung chế phẩm CR, sau đó vệ sinh sạch lồng nuôi.
- Từ ngày thứ 03, thu nhận toàn bộ phân trước mỗi lần cho ăn và vệ sinh lồng nuôi chuột.
- Cân 2,5 g phân trong ngày được cho vào erlen 250 ml, lắc liên tục trên máy lắc ngang với tốc độ 200 vòng/phút trong 30 phút và xác định hàm lượng phospho.
2.3.4.6 Phương pháp thu nhận xương chuột
Sau 15 ngày nuôi tiến hành mổ toàn bộ cá thể chuột trong mỗi lô. Thu nhận xương 4 chi của mỗi cá thể, xương được loại bỏ hết phần thịt và gân. Ngâm rửa xương trong nước cất nóng và loại bỏ chất béo trong xương bằng dung dịch diethyl ether. Rửa sạch và sấy khô đến khối lượng không đổi để xác định khối lượng của xương [125].
Tiến hành tro hóa (mục 2.2.7.6) để xác định hàm lượng canxi (mục 2.3.4.7) và phospho (mục 2.3.4.8).
2.3.4.7 Phương pháp xác định hàm lượng canxi theo phương pháp chuẩn độ
TCVN 1526: 1986
Dùng Trilon B xác định canxi trong dung dịch mẫu với chỉ thị là Murexid (C8H5O6N5) (xem phụ lục 5.3.1).
2.3.4.8 Phương pháp xác định hàm lượng phospho theo TCVN 1525:2001
Tương tự 2.2.5.6., từ mật độ OD đo được dựa vào phương trình đường chuẩn xác định hàm lượng phospho có trong mẫu (xem phụ lục 5.3.2).
Sau 15 ngày nuôi, thực hiện mổ toàn bộ các cá thể trong mỗi lô, máu được thu nhận toàn bộ để tiến hành xác định hàm lượng hemoglobin (theo mục 2.3.4.4), hàm lượng beta-carotene và vitamin A trong huyết thanh chuột.
2.3.4.10 Phương pháp xác định beta-carotene và vitamin A trong huyết thanh
Lấy lượng máu xác định cho vào ống nghiệm có chứa 1 ml lithium citrate nồng độ 20%. Lắc thật kỹ rồi cho vào máy ly tâm 30 phút với tốc độ 2800 vòng/phút. Lấy dịch huyết thanh mang xác định hàm lượng beta-carotene và vitamin A [53].
2.4 KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ PHẨM TRÊN GÀ ĐẺ TRỨNG 2.4.1 Đối tượng, địa điểm thí nghiệm
2.4.1.1 Đối tượng thí nghiệm
Gà thí nghiệm là giống gà chuyên trứng IsaBrown (giống gà của Pháp) nhập từ Thái Lan. Bắt đầu thí nghiệm khi gà ở giai đoạn 26 tuần tuổi và kết thúc vào 42 tuần tuổi.
2.4.1.2 Địa điểm thí nghiệm
Các thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của chế phẩm CR lên gà đẻ trứng được tiến hành tại Doanh nghiệp Tư nhân Mai Thủy với quy mô 30.000 con, địa chỉ thôn Bầu Điển, xã Đá Bạc, huyện Châu Đức, tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu.
Các thí nghiệm kiểm tra chất lượng trứng được thực hiện tại phòng thí nghiệm bộ môn chăn nuôi chuyên khoa, Khoa Chăn nuôi - Thú y, Trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh.
2.4.2 Thành phần thức ăn đối chứng
Thức ăn đối chứng dùng cho gà IsaBrown là thức ăn đậm đặc GD26 Star Feed do Công ty cổ phần chăn nuôi CP VN cung cấp có thành phần gồm bắp, bột đậu nành, cám gạo, bột cá, khoai mì, vitamin, khoáng vi lượng, acid amin, không có hoormon hay kháng hoormon với các chỉ tiêu như bảng 2.11 (theo thông tin in trên bao bì).
Bảng 2.11 Thành phần dinh dưỡng thức ăn đậm đặc GD 26 Star Feed
STT Chỉ tiêu % Klg STT Chỉ tiêu % Klg
1. Độ ẩm tối thiểu 14% 5. NaCl 1 đến 1,3%
2. Canxi tối thiểu 3,5% 6. Năng lượng trao đổi 2100 kCal/Kg
3. Đạm tổng 39% 7. Chất xơ 9%
4. Phospho 3,6 đến 4,2% 8. Kháng sinh Không có