Sự tác ựộng của nhiệt ựộ thấp lên sự phát triển của trứng lợn ựã ựược kiểm tra trên trứng giai ựoạn Germinal vesicle stage (GV) (Rui-Hua Liu và cs, 2003a [59]) và trứng thành thục Metaphase II stage (MII) (Rui-Hua Liu và cs, 2003b [60]). Nhiệt ựộ thấp làm giảm sự thành thục nhân, thành thục tế bào chất, giảm sự hình thành thoi vô sắc và gây tổn thương
Sự thành thục của trứng lợn ựược kiểm tra sau khi trứng ựược làm lạnh ở giai ựoạn GV (Rui-Hua Liu và cs, 2003a [59]). COCs thu từ nang có kắch cỡ trung bình ựược làm lạnh ở 24oC hoặc 4oC khoảng 5, 30 hoặc 120Ỗ. Sau khi làm ấm lại, COCs ựược nuôi trong môi trường thành thục ở 39oC, 5% CO2 trong 44h. Sự hình thành thoi vô sắc (xác ựịnh bởi nhuộm miễn dịch và kắnh hiển vi), sự thành thục nhân (nhuộm orcein) và sự thành thục tế bào chất (phân tắch glutathione nội bào) của trứng ựược kiểm tra sau nuôi thành thục. Khi trứng ựược làm lạnh ở 24oC trong những khoảng thời gian khác nhau, một khuynh hướng giảm sự hình thành thoi vô sắc, sự thành thục nhân và sự thành
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 22
thục tế bào chất ựược chỉ ra, nhưng không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với ựối chứng. Khi trứng ựược làm lạnh ở 4oC, cả sự thành thục nhân và tế bào chất cũng như sự hình thành thoi vô sắc bị ức chế ở hầu hết trứng phụ thuộc thời gian. Những kết quả ựó chỉ ra rằng trứng lợn rất nhạy cảm với sự giảm nhiệt trước khi ựưa vào nuôi. Trứng ựược làm lạnh trước khi nuôi thành thục ngăn cản sự hình thành thoi vô sắc, sự thành thục nhân và tế bào chất.
Ảnh hưởng của làm lạnh lên cấu trúc thoi vô sắc và sự sắp xếp nhiễm sắc thể của trứng lợn thành thục in vitro ựã ựược Rui-Hua Liu và cs (2003b) [60] nghiên cứu. Cấu trúc thoi vô sắc và sự sắp xếp nhiễm sắc thể ựược kiểm tra sau khi trứng ựược làm lạnh ở MII. COCs ựược thu từ nang kắch cỡ trung bình ựược nuôi trong môi trường thành thục ở 39oC, 5% CO2 trong 44h. Ở thời ựiểm kết thúc nuôi, trứng ựược tách cumulus và làm lạnh tới 24 hoặc 4oC trong 5, 30, 120Ỗ. Sau khi ựược làm lạnh, trứng ựược cố ựịnh ngay ựể kiểm tra thoi vô sắc và sự sắp xếp nhiễm sắc thể (NST) hoặc ựược ựưa lại vào môi trường nuôi trong 2h ựể kiểm tra sự hồi phục dây tơ vô sắc. Hầu hết trứng (65-71%) làm lạnh tới 24oC chỉ ra những thoi vô sắc giải trùng hợp một phần nhưng 81- 92% trứng làm lạnh ở 4oC không có thoi vô sắc sau khi làm lạnh trong 120Ỗ. Làm lạnh cũng gây ra sự dị thường NST, ựược chỉ ra bởi sự phân tán NST trong tế bào chất. Sự hạn chế phục hồi thoi vô sắc ựược chỉ ra trong những trứng ựược làm lạnh tới 4 và 24oC bất kể thời gian làm lạnh. Những kết quả ựó chỉ ra rằng thoi vô sắc trong trứng lợn MII rất nhạy cảm với sự giảm nhiệt ựộ. Cả thoi vô sắc và NST ựều bị tổn thương trong suốt quá trình làm lạnh, và tổn thương nhiều không phục hồi lại ựược bởi nuôi trứng sau khi làm lạnh