thành thục
4.2. Ảnh hưởng của khử nước, chất bảo quản lạnh và nhiệt ựộ thấp lên sự sống của trứng lợn sống của trứng lợn
4.2.1. Ảnh hưởng của khử nước lên sự sống của trứng lợn ở nhiệt ựộ phòng phòng
Bảng 4.11. Ảnh hưởng của sự khử nước ở nhiệt ựộ phònglên sự thành thục của trứng lợn (n = 3) Nồng ựộ sucrose (M) Thời gian (phút) Tổng số trứng thắ nghiệm (N) Tỷ lệ trứng thành thục trung bình (%) 5 115 58,47a ổ 2,90 0,5 20 111 62,05a ổ 2,76 1 5 137 55,33a ổ 3,08
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 73 20 123 37,84b ổ 1,45 5 63 52,35a ổ 1,32 2 20 62 15,91c ổ 8,19 đC 71 61,52a ổ 2,60
Trong cùng một cột sự sai khác giữa các giá trị trung bình mang chữ cái khác nhau là có ý nghĩa thống kê (P < 0,05).
Bảng 4.11 cho thấy tỷ lệ trứng lợn thành thục sau khi xử lý khử nước với sucrose nồng ựộ 0,5M trong 5Ỗ và 20Ỗ ở nhiệt ựộ phòng không khác biệt so với lô ựối chứng không khử nước (58,47%, 62,05% so với 61,52%; P > 0,05). Khử nước trứng lợn trong thời gian ngắn 5Ỗ không ảnh hưởng rõ rệt tới tỷ lệ thành thục của trứng so với lô ựối chứng (tỷ lệ trứng thành thục sau khi xử lý khử nước ở cả 3 lô thắ nghiệm với sucrose 0,5; 1; và 2M tương ựương với tỷ lệ này ở lô ựối chứng, P > 0,05). Khử nước trứng lợn ở nồng ựộ cao (sucrose 1M, 2M) trong thời gian 20Ỗ làm giảm rõ rệt tỷ lệ trứng thành thục so với lô ựối chứng (37,84%, 15,91% so với 61,52%, P < 0,05), tỷ lệ giảm tăng lên khi nồng ựộ sucrose tăng (37,84% so với 15,91%, P < 0,05).
đồ thị 4.8 chỉ ra một xu hướng giảm tỷ lệ trứng thành thục khi xử lý khử nước ở nhiệt ựộ phòng. Tuy nhiên, xu hướng này chưa có ý nghĩa thống kê khi khử nước trong thời gian ngắn 5Ỗ. Khi xử lý trong thời gian dài 20Ỗ, xu hướng này thể hiện rõ rệt khi tăng nồng ựộ của sucrose ưu trương (nồng ựộ sucrose ưu trương càng tăng thì tỷ lệ trứng thành thục càng giảm, P < 0,05).
Theo nghiên cứu của Mullen và cs (2007) [40], xử lý trứng lợn với dung dịch không ựẳng trương (dung dịch ưu trương bổ sung sucrose) có ảnh hưởng tới khả năng phát triển của trứng lợn. Trung bình có khoảng 21% trứng lợn có thể phát triển tới blastocyst sau khi nuôi thành thục in vitro mà không
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 74
xử lý với dung dịch không ựẳng trương. Nhưng khi xử lý với dung dịch nhược trương hoặc ưu trương làm giảm một nửa khả năng phát triển của trứng lợn tới blastocyst, tuy nhiên không có sự khác biệt rõ rệt lên sự giảm khả năng phát triển giữa các nhóm có nồng ựộ sucrose khác nhau. Ở thắ nghiệm này, xử lý trứng lợn với dung dịch ưu trương nồng ựộ 0,5 Ờ 2M trong thời gian 5Ỗ không ảnh hưởng lên khả năng phát triển của trứng tới giai ựoạn thành thục metaphase II. Sự khác biệt giữa thắ nghiệm này với ngiên cứu của Mullen và cs có thể do thời gian xử lý trong thắ nghiệm này ngắn (5Ỗ) trong khi nghiên cứu của Mullen và cs xử lý trong thời gian dài hơn (10Ỗ), và nhiệt ựộ xử lý khử nước trong thắ nghiệm này thấp hơn so với nhiệt ựộ xử lý trong nghiên cứu của tác giả (38oC), thêm nữa thắ nghiệm chỉ tiến hành trên trứng tới giai ựoạn thành thục nhân chứ chưa tới giai ựoạn blastocyst. Tuy nhiên, thời gian xử lý khử nước dài hơn trong thắ nghiệm này cũng chỉ ra sự giảm khả năng phát triển rõ rệt của trứng lợn tới giai ựoạn thành thục nhân ở lô thắ nghiệm với nồng ựộ sucrose là 1M, 2M. Kết quả của thắ nghiệm cũng tương tự như trong nghiên cứu của Mullen và cs, tuy nhiên ở nồng ựộ sucrose 0,5M trong 20Ỗ thì không thấy sự khác biệt rõ rệt về tỷ lệ trứng thành thục so với ựối chứng không xử lý khử nước, ựiều này có thể do thắ nghiệm chưa tiến hành ựược tới giai ựoạn nuôi phôi blastocyst.
Agca Y và cs (2000) [1] chỉ ra trứng bò giai ựoạn germinal vesicle (GV) nhạy cảm hơn với stress dung dịch không ựẳng trương hơn so với trứng giai ựoạn metaphase II (MII). Không có trứng giai ựoạn GV phát triển tới blastocyst sau khi nhúng vào dung dịch ưu trương (2400 hoặc 4800 mOsm), trong khi nhúng vào dung dịch nhược trương (75 hoặc 150 mOsm) làm giảm rõ rệt sự hình thành blastocyst so với lô ựối chứng. Tuy nhiên, với trứng bò MII, nhúng vào các dung dịch ưu trương và nhược trương chỉ làm giảm sự
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 75
hình thành blastocyst. Kết quả nghiên cứu của Agca và cs cho thấy sự giảm khả năng phát triển của trứng bò sau khi nhúng trứng bò vào các dung dịch ưu trương hoặc nhược trương trong thời gian 10Ỗ, ựiều này cũng tương tự như trong thắ nghiệm này với thời gian xử lý 20Ỗ với các dung dịch sucrose ưu trương 1M và 2M, mặc dù vậy, ở nồng ựộ sucrose 0,5M không thấy sự khác biệt rõ rệt tỷ lệ thành thục so với ựối chứng.
Phôi cá tra có khả năng khử nước trong thời gian dài hơn so với trứng lợn (kết quả từ bảng 4.1 và 4.10). Tuy nhiên, cả trứng lợn và phôi cá tra ựều có cùng quy luật khử nước. Khử nước thời gian ngắn ở nhiệt ựộ phòng với trứng lợn (5Ỗ) không ảnh hưởng tới tỷ lệ trứng thành thục, ựiều này cũng tương tự như khử nước thời gian ngắn (15Ỗ) với phôi cá tra không làm ảnh hưởng tới tỷ lệ cá tra nở sống. Khử nước với sucrose nồng ựộ cao (1M và 2M) trong thời gian dài (20Ỗ với trứng lợn, 2h với phôi cá tra) ựều làm giảm khả năng phát triển của trứng lợn và phôi cá tra.
Trứng sau khử nước với sucrose 1M
Trứng sau khử nước với sucrose 2M trong 20Ỗ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 76
trong 5Ỗ
Trứng thành thục với thể cực thứ nhất Trứng sau MAT - II
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 77
4.2.2. Ảnh hưởng của nhiệt ựộ thấp lên sự sống của trứng lợn
Bảng 4.12. Ảnh hưởng của nhiệt ựộ thấp lên tỷ lệ trứng lợn thành thục
Nhiệt ựộ (oC) Thời gian (phút) Tổng số trứng thắ nghiệm (N) Tỷ lệ trứng thành thục trung bình (%) 4 5 42 1,85 ổ 1,85 4 20 62 0,00 ổ 0,00 0 5 60 0,00 ổ 0,00
Kết quả từ bảng 4.12 và bảng 4.11 cho thấy trứng lợn rất nhạy cảm với nhiệt ựộ thấp. Xử lý trứng lợn trong thời gian ngắn 5Ỗ làm giảm ựáng kể tỷ lệ trứng thành thục so với không xử lý (1,85% so với 61,52%). Kết quả này tương tự như trong nghiên cứu của Rui-Hua Liu và cs (2003a) [59]. Những tác giả này ựã nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt ựộ thấp 24oC và 4oC lên sự thành thục nhân và tế bào chất của trứng lợn. Kết quả nghiên cứu của họ chỉ ra xử lý ở nhiệt ựộ thấp 24oC làm giảm sự thành thục nhân và tế bào chất của trứng lợn so với ựối chứng nhưng chưa có ý nghĩa thống kê, còn xử lý ở 4oC khiến cho hầu hết trứng lợn bị ức chế thành thục nhân và tế bào chất.
Xử lý trứng lợn ở nhiệt ựộ 4oC trong thời gian 20Ỗ và 0oC trong thời gian ngắn 5Ỗ ựều làm mất khả năng phát triển của trứng lợn tới giai ựoạn thành thục sau khi nuôi in vitro (tỷ lệ trứng thành thục ở cả hai lô ựều là 0%).
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 78