polyphenol oxydase trích ly từ khoai lang
* Mục đích: Tìm ra pH tối thích cho hoạt động của enzyme PPO trích ly từ khoai lang trắng, trên cơ sở đó, đề xuất pH thích hợp để xác định các thông số động học của PPO từ khoai lang trắng tiếp theo.
* Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm đƣợc bố trí với 1 nhân tố Nhân tố A: Giá trị pH, khảo sát ở 9 mức độ
A1: 6,0 A2: 6,5 A3: 7,0 A4: 7,5 A5: 8,0 A6: 8,5 A7: 9,0 A8: 9,5 A9: 10,0
Tổng số nghiệm thức: 9 nghiệm thức
Tổng số mẫu thí nghiệm: 9 x 3 lần lặp lại = 27 mẫu
Tổng khối lƣợng mẫu thí nghiệm: 27 mẫu x 100 g/mẫu = 2.700 (g)
* Tiến hành thí nghiệm: Nguyên liệu đƣợc thu nhận từ một số địa phƣơng, vận chuyển về phòng thí nghiệm, xử lý sơ bộ (rửa sạch, loại bỏ bùn, đất bám bên ngoài) và phân tích độ ẩm nguyên liệu ban đầu. Tiến hành ly trích enzyme PPO thô theo mục 3.2.2 và đo hoạt tính PPO theo phƣơng pháp mô tả ở mục 3.2.3. Ở mỗi ống nghiệm cho vào lần lƣợt 3,9 mL đệm phosphate 0,1 M có pH thay đổi từ 6 ÷ 10, 1 mL dung dịch catechol nồng độ 0,05 M. Phản ứng enzyme đƣợc bắt đầu bằng việc bổ sung 0,1 mL dịch trích enzyme thô PPO. Hỗn hợp đƣợc nhanh chóng
chuyển vào cuvette và đo quang phổ hấp thu. * Sơ đồ bố trí thí nghiệm Khoai lang trắng Xử lý sơ bộ Trích ly enzyme thô
Thí nghiệm 1: Xác định ảnh hƣởng của pH đến hoạt tính của enzyme polyphenol oxydase trong khoai lang.
Giá trị pH tối ƣu cho hoạt động của enzyme PPO
Hình 3.3: Sơ đồ bố trí thí nghiệm 1
* Các chỉ tiêu theo dõi: Độ hấp thu A của PPO tƣơng ứng với từng điều kiện pH khảo sát. Hoạt tính PPO đƣợc xác định dựa trên tính toán tỷ lệ % hoạt tính PPO còn lại ở giá trị pH tối ƣu.
* Kết quả thu nhận: Giá trị pH tối ƣu cho hoạt động của enzyme