6. Dự kiến cấu trúc luận văn
2.6.1.2.Phân lập các chất từ cặn chiết etyl axetat
Kiểm tra trên sắc ký bản mỏng chúng tôi thấy dịch chiết etyl axetat khả thi nên tiến hành nghiên cứu thành phần hóa học trên dịch etyl axetat. Quá trình phân lập các chất từ cặn chiết etyl axetat thân của loài Adenosma indiana
(Lour.) Merr. được trình bày theo sơ đồ 2.1.
Từ 8,35 g cặn chiết etyl axetat được hòa tan vừa đủ bằng hỗn hợp dung môi CH2Cl2/MeOH và trộn với 20 g silicagel, quay cất đến khô, sau đó nghiền thành bột mịn để các chất hấp phụ đều trên silicagel. Bột silicagel có tẩm dịch chiết này được sử dụng để đưa lên cột sắc ký.
Silicagel Merck (cỡ hạt 0,043-0,063 mm; 200 g) được nhồi vào cột sắc ký có kích thước 5cm x 27cm theo phương pháp nhồi ướt với dung môi ban đầu là n-hexan 100%. Sau khi cột đã ổn định, bột silicagel tẩm dịch chiết được đưa lên cột và giải hấp với hệ dung môi rửa giải là n-hexan: EtOAc có độ phân cực tăng
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - ĐHTN 32 http://www.lrc-tnu.edu.vn/
dần (lượng EtOAc tăng dần từ 0→100%) thu được các phân đoạn khác nhau. Từ các phân đoạn này được gộp thành các phân đoạn có kí hiệu là: ACE1-ACE18 theo kết quả kiểm tra trên sắc ký lớp mỏng.
Phân đoạn ACE3 (125 mg) được làm sạch lại trên cột silicagel với hệ dung môi rửa giải là n-hexan: EtOAc = 9:1 thu được 8 mg chất sạch thứ nhất ký hiệu là AC4. Sắc kí lại trên cột silicagel (dung môi rửa giải là CH2Cl2: MeOH = 9.5 : 0.5) phân đoạn ACE10-12 thu được 114 mg chất sạch thứ hai ký hiệu là AC1.
Chất rắn xuất hiện ở phân đoạn ACE15 được kết tinh lại trong hỗn hợp CH2Cl2/ MeOH thu được 8,3 mg chất sạch thứ ba ký hiệu là AC9.
Quy trình chiết tách và phân lập ba chất trên được thể hiện trên sơ đồ 2.1.
1. Phơi khô, nghiền nhỏ
2. Ngâm chiết với MeOH ở nhiệt độ phòng
3. Quay cất dung môi dưới áp suất giảm
4. Cất quay chân không, loại metanol
SKC silicagel: n-hexan: EtOAc, lượng EtOAc tăng từ 0-100% 1. Chiết lần lượt với các dung môi hexan, etyl axetat và n-BuOH
2. Quay cất dung môi dưới áp suất giảm
3. Cất quay chân không, loại metanol
Mẫu phần thân loài
Adenosma indiana (Lour.) Merr.(1050g) (1.1 kg) Cặn n-hexan (6,12g) Cặn EtOAc (8,35g) Cặn MeOH (32g) Phân đoạn ACE15 Phân đoạn ACE3 Chất AC4 (8 mg) Chất AC1 (114mg) Chất AC9 (8,3 mg) Kết tinh với CH2Cl2/MeO H SKC silicagel: n-hexan: EtOAc = 9 :1 SKC silicagel: CH2Cl2:MeOH = 9.5 :0.5 Phân đoạn ACE10-12
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu - ĐHTN 33 http://www.lrc-tnu.edu.vn/
Sơ đồ 2.1: Sơ đồ chiết, tách các chất từ phần thân của loài Adenosma indiana (Lour.) Merr
2.6.2. Dữ kiện phổ của các chất phân lập đƣợc