- Thắ nghiệm 2: đánh giá ựặc tắnh kháng mốc sương thông qua lây
2.3.5. Phương pháp lây nhiễm nhân tạo trên các lát cắt củ ỘTuber slice testỢ (Darsow et al., 2004; Hammann et al., 2009).
testỢ (Darsow et al., 2004; Hammann et al., 2009).
- Chuẩn bị: dịch lây nhiễm, khay lưới chứa lát củ lây nhiễm, dao, pipet, giấy thấm,Ầ
- Quy trình tiến hành lây nhiễm nhân tạo trên các lát cắt củ:
Bước 1: chuẩn bị dịch lây nhiễm:
- Dịch lây nhiễm là dung dịch ựộng bào tử của nấm Phytophthora infestans có mật ựộ khoảng 5x104 ựộng bào tử/ml. Ta có thể chuẩn bị dịch lây nhiễm bằng cách pha loãng với nước cất ựể ựược dung dịch ựộng bào tử có mật ựộ 14x103 ựộng bào tử/ml ở nhiệt ựộ 5 - 120 C trong 1,5 - 3 tiếng trước khi tiến hành lây nhiễm.
Bước 2: chuẩn bị các lát củ:
- Các củ mới ựược thu hoạch (trong vòng 24h) hoặc cho các củ ựã ựược bảo quản (từ 1 - 2 tháng ở 8 - 9ồC).
khoảng 0,7 Ờ 1cm, làm khô bề mặt bằng giấy thấm.
- Xếp các lát củ vào khay lưới lây nhiễm, lót vải màn ựã ựược làm ẩm.
Bước 3: Lây nhiễm nhân tạo trên lát củ:
- Nhỏ 1 giọt dịch lây nhiễm (20 - 30 ộl) lên giữa lát cắt củ, ựậy kắnh lên khay gỗ và chuyển vào ựiều kiện lây nhiễm nhân tạo: các khay chứa lát củ ựược ựặt trong phòng lây nhiễm nhân tạo, yêu cầu không ánh sáng, nhiệt ựộ từ 16 - 180C, thường xuyên theo dõi ựộ ẩm khay lây nhiễm ựể ựảm bảo ẩm ở mức 80% là thắch hợp (nếu không ựủ ẩm tiến hành tưới nước bổ sung lên vải màn ựặt dưới khay gỗ).
- Một ngày sau lây nhiễm, tiến hành lật ựảo các lát cắt củ .
Bước 4: Cho ựiểm và ựánh giá:
- Sau khi lây nhiễm 7 ngày ta có thể thấy nấm xuất hiện ở bề mặt trên của củ và sự ựổi màu ở mặt sau của lát cắt củ. Tiến hành ựánh giá và cho ựiểm dựa vào hình dạng và tỉ lệ diện tắch vết hoại tử và sự phát triển của hệ sợi nấm.
- đo vết hoại tử trên bề mặt sau của lát củ: Sự ựổi màu ở mặt sau của củ. đánh giá theo thang ựiểm từ 1 - 9, giá trị ựiểm từ 1 - 3 cho thấy biểu hiện kháng, số ựiểm từ 4 - 9 cho thấy biểu hiện mẫn cảm.
- đo sự hình thành phát triển của bào tử trên bề mặt trên của lát cắt củ: đánh giá theo thang ựiểm từ 1 - 3; 1 = không có hoặc ắt bào tử nấm; 2 = bào tử nấm phát triển trung bình; 3 = bào tử nấm phát triển mạnh).