Có rất nhiều phương pháp phân đoạn protein từ các dịch chiết enzym nói chung, có thể phân đoạn bằng dung môi hữu cơ, bằng muối của kim loại nặng, bằng (NH4)2SO4, bằng các phương pháp sắc kí trao đổi ion sắc kí sàng lọc phân tử trên các chất mang khác nhau. Tuy nhiên phân đoạn các hỗn hợp protein bằng muối là một phương pháp đơn giản rẻ tiền mà lại rất tiện lợi và trong nhiều trường hợp mang lại hiệu quả làm sạch rất cao. Trong đó tủa phân đoạn
bằng muối (NH4)2SO4 là phương pháp được sử dụng rộng rãi trong enzym học
để tách chiết và làm sạch các enzym. Muối này hoà tan trong nước rất tốt cho nên cho phép phân tách tốt các phân đoạn protein. Ngoài ra, độ tan của amoni sulfat ít phụ thuộc vào nhiệt độ và nó không gây tác động hại lên các enzym, mà trong nhiều trường hợp lại còn làm ổn định enzym. Phương pháp này cũng cho phép đánh giá một số tính chất hoá lý của protein vì khả năng kết tủa của một protein phụ thuộc nhiều vào hình dạng, kích thước phân tử và điểm đẳng điện của nó. Mỗi loại protein khác nhau sẽ tủa trong các vùng nồng độ amoni sulfat bão hòa khác nhau.
Sau khi sử dụng nhiệt độ để loại các protein tạp kém bền nhiệt, phần protein còn lại bền nhiệt chúng tôi đem tủa phân đoạn bằng muối amoni sulfat
ở các vùng từ 10% đến 80% nồng độ bão hòa. Kết quả nghiên cứu cho thấy RNase từ DCTE trong cả 2 loại môi trường đều tủa ở vùng 30-50% nồng độ amoni sulfat bão hòa còn đối với DCTC trong cả 2 loại môi trường RNase đều tủa ở vùng 50-60% nồng độ bão hòa. Phương pháp tủa phân đoạn protein bằng muối amoni sulfat đã đạt được cả 2 mục đích là tinh sạch và cô đặc lại enzym. Tuy nhiên thực tế phương pháp này cũng có những nhược điểm nhất định như tốn nhiều thời gian để thực hiện và đặc biệt là cần phải loại sạch muối sau khi phân đoạn protein để chuẩn bị cho bước tinh sạch tiếp theo. Có thể loại muối bằng màng thẩm tích hoặc dùng cột loại muối. Trong đề tài này chúng tôi đã chọn cột sephadex G25 để loại muối amoni sulfat và kết quả loại muối là rất tốt.