2.2.1. Phương pháp thực nghiệm
2.2.1.1. Điều tra xác định thành phần côn trùng bắt mồi và vật mồi trên ruộng đậu rau rau
Trên cây đậu rau tại địa điểm nghiên cứu, chúng tôi tiến hành điều tra sơ bộ để khái quát chung tình hình trong khu vực. Sau khi điều tra sơ bộ thì tiến hành xác định và chọn lựa các điểm có vị trí ngẫu nhiên, có tính chất đại diện cho toàn bộ vùng nghiên cứu.
Điều tra theo phương pháp điều tra cơ bản chung của Viện Bảo vệ thực vật (1997) [22]. Tiến hành điều tra trên các ruộng đậu rau tại Nam Đàn – Nghệ An theo phương pháp tự do. Tại các điểm đã chọn, tiến hành điều tra theo phương pháp tự do không cố định điểm điều tra, điều tra 10 điểm ngẫu nhiên nằm trên đường chéo của khu vực điều tra. Điều tra thành phần loài được thực hiện 1 tuần/1 lần, sử dụng vợt côn trùng có đường kính từ 35-40cm, L=70-80 cm, vợt đập có đường kính vòng vợt là 60cm, chiều dài vợt trên 3m hoặc tay để thu mẫu. Tiến hành thu bắt toàn bộ các loài côn trùng bắt mồi xuất hiện trên ruộng đậu rau điều tra ở các điểm đã lựa chọn và khu vực lân cận (bờ mương, bờ cỏ xung quanh ruộng rau, khu vực trồng đậu rau). Song song với biện pháp điều tra ngẫu nhiên, tiến hành đặt các bẫy hố = 10 cm và H = 15 cm được chôn dưới mặt đất của các luống đậu rau, gần bờ ruộng, gần tàn dư quanh bờ với mật độ bẫy là 50 bẫy/ 500 m2, sử dụng dung dịch xà phòng để giữ mẫu vào bẫy. Ngoài việc điều tra trên các ruộng đã chọn chúng tôi còn tiến hành điều tra trên các ruộng lân cận, trên bờ cỏ dại và trên một số loại cây đậu rau khác xung quanh khu vực trồng rau để theo dõiquan sát ghi nhận vật mồi của loài bọ xít nghiên cứu.
Các cá thể côn trùng bắt mồi thu được, một phần xử lý chết bằng lọ độc (chứa Clofukaly) và lưu giữ trong các đệm bông (10x20 cm) hoặc ngâm trong cồn 700 để định loại, lưu mẫu; một phần được theo dõi sống trong các hộp nuôi có kích thước ở trong phòng thí nghiệm nhằm tiến hành các thực nghiệm xác định sức ăn mồi của chúng. Các mẫu côn trùng bắt mồi thu được đều tiến hành ghi nhãn theo tiêu chuẩn chung của phân loại học.
Những loài côn trùng bắt mồi trên đậu rau quen thuộc đã được các tài liệu khác công bố, chúng tôi chỉ cần căn cứ vào sự hiện diện của chúng trên địa điểm điều tra để đưa tên chúng vào bảng danh lục thiên địch sâu hại đậu rau. Với các đối tượng mới phát hiện, chỉ ghi nhận chúng là thiên địch nếu thấy rõ chúng tấn công và ăn thịt vật mồi là sâu hại đậu rau. Mức độ phổ biến các loài được lượng hóa theo tần suất bắt gặp (%).
2.2.1.2. Điều tra diễn biến số lượng tập hợp côn trùng bắt mồi, loài BXBM C. fuscipennis và vật mồi của chúng (các loài sâu hại chính trên cây đậu rau) fuscipennis và vật mồi của chúng (các loài sâu hại chính trên cây đậu rau)
Để xác định biến động số lượng và mối quan hệ giữa côn trùng bắt mồi, loài
C. fuscipennis Reuter và vật mồi của chúng ngoài đồng ruộng, tiến hành chọn các ruộng điều tra đại diện cho vùng nghiên cứu. Các điểm nghiên cứu có điều kiện canh tác giống nhau được trồng ngoài đồng. Mỗi đợt điều tra, tiến hành chọn 5 ruộng điều tra, mỗi ruộng điều tra chọn 5 điểm điều tra theo đường chéo góc ruộng, mỗi điểm có diện tích 1 m2. Tiến hành điều tra định kỳ 7-10 ngày một lần, các điểm điều tra lần sau không trùng với điểm điều tra trước đó theo phương pháp nghiên cứu của Viện Bảo vệ thực vật (Tập I và III Viện bảo vệ Thực vật, 1997 và 2000) [22][23]. Mật độ của các loài BXBM được tính là con/m2.
Song song với việc điều tra mật độ của các loài côn trùng bắt mồi, loài
C. fuscipennis thì tiến hành điều tra mật độ của một số loài sâu hại có mặt trên
đậu rau, đặc biệt chú ý tới các loài hại phổ biến có mặt như: sâu cuốn lá Omiodes indicata, sâu đục quả đậu Maruca vitrata. Tiến hành theo dõi mối quan
côn trùng bắt mồi, loài C. fuscipennis dưới ảnh hưởng của một số điều kiện sinh thái kể trên bằng cách đếm toàn bộ số lượng côn trùng bắt mồi, vật mồi ghi vào phiếu điều tra. Mật độ được tính theo đơn vị là con/m2. Việc điều tra được tiến hành vào thời gian nhất định trong ngày (6 giờ - 8 giờ) vào mùa hè và 7 giờ đến 10 giờ vào mùa đông).
2.2.1.3. Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh học của BXBM Coranus fuscipennis Reuter
Nuôi bọ xít bắt mồi trong hộp nhựa sạch đường kính từ 15-20cm và cao 15- 25cm ( hộp nuôi) có sẵn lá cây đậu rau hoặc lá rau, cho chúng ăn thêm bằng mật ong pha loãng 10% và 50% và nước lã nhằm mục đích thu trứng của chúng để nuôi lấy sâu non có bông giữ ẩm, đậy vải màn để thông không khí đối với hộp nuôi. Mỗi hộp nuôi đều có ký hiệu cụ thể (ngày nuôi, thức ăn, tuổi nuôi riêng...vv) tương ứng với các phiếu theo dõi. Cá thể trưởng thành được nuôi mỗi hộp nuôi một cặp (1 đực, 1 cái). Thiếu trùng được nuôi theo cá thể trong mỗi hộp nuôi để theo dõi thời gian phát dục hoặc nuôi theo nhóm với số lượng 5 cá thể trong một hộp nuôi để nghiên cứu tập tính cạnh tranh mồi cũng như ảnh hưởng của vật mồi tới chúng. Các hộp nuôi được đặt trong điều kiện phòng thí nghiệm với nhiệt độ: 27 -30,60C, ẩm độ 74,2 - 80 %. Số lượng theo dõi đối với trứng là từ 100 – 150 quả trứng cho 1 lần thí nghiệm, với thiếu trùng từ 25 –45 cá thể thiếu trùng/ 1 lần thí nghiệm và 20-25 cá thể trưởng thành/ 1 lần thí nghiệm. Vật mồi để nuôi BXBM bao gồm sâu khoang, sâu cuốn lá đậu thu thập chủ yếu ở ngoài cánh đồng trồng đậu rau, trồng rau và ấu trùng của ngài gạo
Corcyra cephalonica được nuôi trong phòng thí nghiệm với thức ăn là cám gạo trộn với bột ngô.
Hàng ngày theo dõi và cung cấp con mồi cho BXBM với số lượng con mồi từ 5- 7 cá thể/ngày/1 hộp nuôi. Thường xuyên thay các cá thể con mồi chết và bổ sung con mồi sống, đồng thời vệ sinh lọ nuôi, thay bông giữ ẩm, thay lá đậu rau.
Các chỉ tiêu theo dõi: Kích thước (mm) của trứng (chiều dài, chiều rộng), kích thước thiếu trùng (gồm chiều dài, chiều rộng, độ rộng ngực), kích thước trưởng
thành (gồm chiều dài phần đầu, chiều dài phần ngực, độ rộng phần ngực, chiều dài cơ thể, độ rộng nhất phần bụng). Thời gian phát dục của các pha (ngày), thời gian sống của trưởng thành (ngày), khả năng đẻ trứng và nhịp điệu đẻ trứng, tỷ lệ nở của trứng (%), theo phương pháp nghiên cứu của Viện Bảo vệ thực vật (1997 và 2000) [22,23].
2.2.1.4. Xác định khả năng ăn mồi của loài Coranus fuscipennis Reuter trong phòng thí nghiệm và thử nghiệm khả năng khống chế vật mồi trong nhà lưới thí nghiệm và thử nghiệm khả năng khống chế vật mồi trong nhà lưới
- Phương pháp thử nghiệm khả năng ăn mồi của loài C. fuscipennis Reuter qua các giai đoạn từ tuổi 2 đến trưởng thành trong điều kiện phòng thí nghiệm. Vật mồi là ấu trùng tuổi 1,2,3 loài Corcyra cephalonica, sâu đục quả đậu Maruca vitrata
và sâu cuốn lá đậu Omiodes indicata. Hàng ngày cho số lượng con mồi từ 5-7 cá thể/ngày. Thay con mồi chết và bổ sung con mồi sống, vệ sinh lọ nuôi, thay bông giữ ẩm, thay lá đậu rau - thức ăn của sâu. Theo dõi trong 3 ngày, đếm số lượng vật mồi bị ăn và chết (chưa ăn hết). Chỉ tiêu theo dõi là khả năng ăn mồi (con/ngày), theo phương pháp nghiên cứu của Viện Bảo vệ thực vật (1997 và 2000) [22,23].
- Phương pháp thử nghiệm khả năng khống chế vật mồi của loài Coranus fuscipennis trong nhà lưới đối với loài sâu cuốn lá O. indicata. Bố trí thí nghiệm trong nhà lưới có diện tích 2 m2/ ô. Mỗi ô đều được trồng đậu rau. Thí nghiệm gồm 4 công thức với 3 lần nhắc lại.
Công thức I 1: Mật độ 1 con/m2
Công thức I 2: Mật độ 2 con/m2
Công thức I 3: Mật độ 3 con/m2
Công thức đối chứng: Không thả
Cùng thời điểm thả loài C. fuscipennis, tiến hành thả vật mồi sâu cuốn lá
+ Bố trí thí nghiệm tương tự đối với vật mồi là sâu đục quả M. vitrata (thả với mật độ 50 con/m2 vào thời điểm cây ra hoa). Thí nghiệm gồm 4 công thức và 3 lần nhắc lại.
Công thức II1: Mật độ 1 con/m2
Công thức II2: Mật độ 2 con/m2
Công thức II 3: Mật độ 3 con/m2
Công thức đối chứng: Không thả
Điều tra mật độ sâu còn sống ở 1, 3, 7 ngày sau thả. Chỉ tiêu theo dõi: mật độ sâu đục quả và mật độ sâu cuốn lá (con/m2)
2.2.1.5. Nghiên cứu ảnh hưởng của một số loại thuốc bảo vệ thực vật đến BXBM Coranus fuscipennis Reuter Coranus fuscipennis Reuter
- Sau khi tiến hành điều tra tình hình sử dụng thuốc BVTV của nông dân trên cây đậu rau tại vùng Nam Đàn, Nghệ An và xác định 3 loại thuốc nông dân sử dụng nhiều nhất để phun trừ sâu hại trên cây đậu rau gồm: Vertimec 1.8EC, Sherpa 25EC, Trigard 100SL .
- Pha các loại thuốc trên theo nồng độ khuyến cáo: Sherpa 25 EC pha theo nồng độ 0,19%, Vertimex 1.8EC pha theo nồng độ 0,1%, Trigard 100SL pha theo nồng độ 0,2%.
- Tiến hành bố trí thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng của 3 loại thuốc BVTV trên đến loài C. fuscipennis trong điều kiện phòng thí nghiệm và nhà lưới.
+ Đối với trứng: Thí nghiệm ảnh hưởng của 3 loại thuốc Vertimex 1.8EC, Sherpa 25EC, Trigard 100SL tới tỷ lệ nở của trứng được thực hiện trong điều kiện phòng thí nghiệm với số lượng trứng là 50 quả, trứng lấy làm thí nghiệm là trứng được cá thể cái đẻ sau 1 ngày, 3 ngày và sau 5 ngày. Trứng sau khi đẻ được 1, 3 và 5 ngày cho tiếp xúc với thuốc bằng phun sương mù trên quả trứng được đặt trên giấy thấm. Công thức đối chứng cho trứng tiếp xúc với nước lã. Các công thức được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với 4 công thức (CT) và 3 lần nhắc lại.
CT III 1: Vertimex 1.8EC nồng độ 0,1 % CT III 2: Sherpa 25 EC nồng độ 0,19 % CT III 3: Trigard 100SL nồng độ 0,2 % CT đối chứng: Phun nước lã.
Sau khi cho trứng tiếp xúc với thuốc, tách riêng và theo dõi số trứng nở sau phun để xác định tỷ lệ nở của trứng sau phun ở thời điểm 1 ngày sau đẻ, 3 ngày sau đẻ, 5 ngày sau đẻ.
+ Đối thiếu trùng: Lựa chọn các cá thể thiếu trùng (tuổi 4, tuổi 5) khỏe mạnh. Bố trí các công thức thí nghiệm trong hộp xốp đã được trồng đậu rau (trong đó có sâu hại là thức ăn của bọ xít bắt mồi) với số lượng 15 con/hộp. Thí nghiệm gồm 4 công thức và 3 lần nhắc lại.
CT IV 1: Vertimex 1.8EC nồng độ 0,1 % CT IV2: Sherpa 25 EC nồng độ 0,19 % CT IV 3: Trigard 100SL nồng độ 0,2 % CT đối chứng: Phun nước lã.
Tiến hành phun thuốc bằng bình phun tay, các công thức được phun cùng thời điểm vào buổi chiều mát. Đếm số lượng cá thể bọ xít còn sống sau 1, 3, 5, 7 ngày sau khi phun theo phương pháp nghiên cứu của Viện Bảo vệ thực vật (1997 và 2000) [22, 23].
2.2.1.6. Phương pháp làm mẫu vật, bảo quản và định loại
Hầu hết các mẫu vật trưởng thành của các loài côn trùng bắt mồi được làm tiêu bản và sấy ở nhiệt độ 500C trong khoảng thời gian từ 2-3 ngày. Mẫu vật được bảo quản trong các hộp gỗ kín để ở nơi khô ráo và thoáng mát. Các cá thể của thiếu trùng, trứng và xác lột thu trong phòng thí nghiệm được bảo quản trong các ống nghiệm, lọ nút mài hoặc lọ thuỷ tinh và được bảo quản trong cồn 700. Tất cả các
mẫu vật đều được ghi nhãn đầy đủ theo tiêu chuẩn phân loại qui định theo phương pháp nghiên cứu của Viện Bảo vệ thực vật 1997 và 2000) [22, 23].
Lập phiếu phân tích mẫu đối với từng loài côn trùng bắt mồi thu được. Tiến hành định tên dựa theo các tài liệu: China, Miller (1955) ; Distant (1910); Livingstone et al. (1992,1998) ; Murugan, Livingstone (1995) ; Li Yongxi et al. (1988) và một số tài liệu khác.
2.2.2. Phương pháp xử lý số liệu
2.2.2.1. Chỉ tiêu theo dõi và phương pháp tính toán
- Mức độ bắp gặp được lượng hóa theo số lần bắt gặp
Số lần bắt gặp A (%) = × 100 Số lần điều tra + : Ít bắp gặp (< 20% số lần bắt gặp) ++: Bắp gặp trung bình (20 – 50% số lần bắt gặp) +++: Bắp gặp nhiều (> 50% số lần bắt gặp)
Tổng số sâu điều tra (con)
- Mật độ sâu, thiên địch (con/m2) = --- Tổng diện tích điều tra (m2)
- Kích thước trung bình của cơ thể Xi
X tb(mm) = × 100 N
Trong đó: Xtb là giá trị trung bình kích thước của cơ thể Xi là giá trị kích thước của cá thể thứ i
N là số cá thể theo dõi. - Thời gian phát dục từng pha (ngày)
X : Thời gian phát dục trung bình xi : Thời gian phát triển của cá thể thứ i
xi.ni ni : Số cá thể có cùng thời gian phát triển X = --- N: Tổng số BXBM nuôi. N BXBM nở ra - Tỷ lệ nở (%) = --- trứng theo dõi Xi
- Khả năng tiêu thụ con mồi (%) = ---× 100
N
Xi là lượng con mồi bị ăn
N là tổng số cá thể thí nghiệm.
- Hiệu lực của thuốc (Tính theo công thức Abbott):
Trong đó: Ca: Số cá thể sống ở công thức đối chứng Ta: Số cá thể sống ở công thức thí nghiệm
2.2.2.2. Phần mềm xử lý số liệu
Số liệu được xử lý bằng phần mềm EXCEL và IRRISTAT 4.0, sử dụng phương pháp thống kê so sánh Duncan giữa các công thức thí nghiệm ở mức xác suất P=0,05
2.3. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
Nghiên cứu thực nghiệm và điều tra được tiến hành trên hệ sinh thái trồng đậu rau tại vùng trồng rau ở xã Nam Anh, huyện Nam Đàn, tỉnh Nghệ An. Các nghiên cứu sinh học, sinh thái của loài bọ xít nâu Coranus fuscipennisReuter được tiến hành trong phòng thí nghiệm và nhà lưới của Trung tâm Bảo vệ thực vật vùng khu 4.
Thời gian nghiên cứu: năm 2013-2014. Ca - Ta
Hiệu lực thuốc (%) = --- x 100 Ca
CHƯƠNG III
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1. Thành phần côn trùng bắt mồi trên đậu rau và vật mồi của chúng
Trong các hệ sinh thái tự nhiên cũng như trong những hệ sinh thái nông nghiệp trên đồng ruộng luôn tồn tại mối quan hệ giữa các loài sinh vật gây hại và các loài sinh vật có ích. Giữa chúng luôn có sự tác động qua lại lẫn nhau, loài này kìm hãm cũng như thúc đẩy sự phát triển của loài kia và ngược lại. Chính vì lí do đó, khi trên đồng ruộng xuất hiện các loài sâu hại thì song song với nó cũng sẽ xuất hiện một lực lượng đối địch với sâu hại gọi là thiên địch (hay kẻ thù tự nhiên). Các loài thiên địch có tác dụng điều hòa số lượng các loài sâu hại, chúng có khả năng kìm hãm sự gia tăng quần thể của các loài sâu hại. Do đó, việc hiểu biết về thành phần các loài thiên địch cũng như mối quan hệ của chúng với các loài sinh vật gây hại trong hệ sinh thái đồng ruộng là rất quan trọng. Đó là một trong những cơ sở khoa học giúp bảo tồn đa dạng sinh học và cân bằng sinh thái, nâng cao hiệu quả công tác phòng trừ dịch hại cây trồng.
Trong những năm qua, chương trình quản lý dịch hại tổng hợp (IPM) trên các cây trồng như: lúa, đậu tương, ngô, lạc và rau (chủ yếu cây rau họ hoa thập tự) đã được áp dụng, tuy nhiên việc điều tra các loài côn trùng bắt mồi trong đó các loài bọ